Protein Purification 과 NMR(Backbone assignment)

소개글

단백질 추출과 단백질 분석 방법인 NMR(Nuclear magnetic resonance)의 방법에 대해 알아본 보고서입니다.

목차

Protein labeling & separation
Backbone assignment

본문내용

Protein labeling & separation
protein을 purification 하는 과정은 크게 원하는 gene을 cloning, overexpression, separation 3과정으로 나누어진다. gene을 cloning하기 위해서는 vector를 이용한다. vector에 필요한 protein의 gene을 multiple cloning site에 restriction enzyme 과 ligase로 manipulation시킨다. protein이 cloning될 때 tag가 없다면 정제해내기가 어렵다. 그래서 cloning할 때 GST나 His를 원하는 protein에 붙여 tag하여 GST는 glutathione, His는 Ni가 인식하여 protein을 골라낼 수 있게 한다. vector를 electroporation을 이용하여 E.coli같이 expression이 빨리되는 organism에 넣어준다. vector를 넣어줄 때는 cell농도가 OD=0.5-0.6정도 되었을 때 넣어준다. 그러고 난 뒤 IPTG를 0.1mM정도 되도록 넣어주면 protein이 overexpression되고 optical density로 protein이 적당히 생기면 organism을 sonication으로 lysate시켜 protein(soluble part)을 cell로부터 꺼낸다

참고 자료

없음