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미생물의 총균수와 생균수 측정

*종*
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최초 등록일
2009.10.10
최종 저작일
2008.05
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소개글

미생물의 총균수와 생균수 측정에 관한 방법

목차

I.미생물의 계수
1)계수판(counting chamber)
2)한천막법(agar film counting)
2.생균수(Viable cell counts)
1)집락수(plate count, colony count)
2)최확수(Most Probable Number)
3)세포분열횟수
3.균체를 측정하는 다른 방법들..
1)건조중량 측정
2)흡광도 측정
3)ATP 측정
4)세포벽 성분
5)엽록소 및 광합성 색소
6)DNA 및 특정 단백질

본문내용

I.미생물의 계수
1.총균수 측정
특정 미생물 또는 일정 환경에 존재하는 미생물의 수를 현미경으로 직접 관찰하여 계수하는 방법. 단점은 시료를 계속하여 다른 실험에 이용할 수가 없다는 것과, 세균이 생균인지 사균인지 알지 못한다는 것이다.
1)계수판(counting chamber)
크기가 비교적 큰 미생물은 hematocytometer와 같은 chamber에 시료를 넣고 간격속의 미생물을 계수한다
평판계수법에 사용되는 Serial dilution의 예.
살아 있는 세균은 colony를 형성한다는 것을 전제로 한다. 따라서 평판 배지 상에 형성된 colony의 수는 시료 내에 포함되어 있는 colony형성이 가능한 살아 있는 세균의 숫자로 볼 수 있다.
재료 : 멸균평판배지, 미생물시료, 멸균식염수, 멸균시험관, 항온수조, 항온배양기
방법 :
Serial dilution을 이용하여 희석된 균액을 준비한다.
적절한 희석균애 0.1ml를 취해 45℃의 항온 수조에 준비된 액상의 한천 배지에 넣고 잘혼합한 뒤 멸균 페트리 접시에 부어 혼합 평판 배양(pour plat method) 혼합 평판 배양 (pour plate method)
① test tube 입구를 불꽃으로 너무 오랫동안 가열하거나, 가열 후 즉시 주입하게 되면 배지가 타고 거품이 발생하므로 test tube 입구를 충분히 식힌 후 주입한다.
② 액상 Agar 배지를 petri dish에 주입할 때 기포가 생기지 않도록 서서히 부어야 하며, petri dish를 회전시 킬 때에도 기포가 발생하지 않도록 주의한다.
③ 유리 표면에 흡착하는 균이 있으므로 petri dish를 회전시킬 때 빨리 조심스럽게 흔든다. 배지가 굳은 후에, 접시를 뒤집은 상태로 항온기에 넣고 37℃에서 48~72시 간 배양한다.
④ 배양한 후 집락의 수가 30~300의 법위가 되는 희석 배율의 평판 배지를 골라 colony의 수를 구한다. 집락의 수에 희석 배율을 곱하면 원래의 시료 1ml에 존재 하는 세균 중, 집락 형성 능력이 있는, 즉 살아 있는 세균의 평균수를 구할 수 있 다. 희석액을 0.1ml 접종한 경우에는 동일한 희석액 1ml를 가한 경우 보다 10배 를 더 곱해야 한다.
ex) 1:1,000으로 희석한 희석액 0.1ml 접종한 배지의 colony수가 150개 있다면, 시료 1ml의 평균 세균수는 150 X 1000 X 10 =1,500,000세균/ml 또는 1.5X10이 된다.

참고 자료

1.대학미생물학, 민경희, 김치경, 조민기 편저, 탐구당, 1994
2.미생물학 실험서 한국미생물학회 을유문화사
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