유전자조작(예비).

목차

◆ 실험 목표
◆ Material
◆ 실험 원리

본문내용

◆ 실험 목표

Ⅰ DNA 제한효소 처리.
재조합 DNA 분자를 제조하기 위해 DNA의 농도를 측정하고 제한효소를 이용하여 절단.

Ⅱ ligation을 통한 재조합 plasmid 제조
제한효소가 처리된 DNA에 ligase를 처리하여 최종적으로 재조합 DNA 분자를 제조.

Ⅲ 재조합 plasmid를 이용한 혈질전환 및 재조합 대장균 선별
특정 유전자가 삽입되어 있는 plasmid DNA를 숙주세포인 competent cell(E.coli XL1-blue)에 도입시키고 재조합 된 DNA를 보유하고 있는 숙주세포를 선별하는 방법 익힘.

◆ Material

․ Insert DNA
plasmid DNA의 MCS자리에 끼워넣을 DNA. TRAIL을 사용하였다. 약600bp

․ Vector DNA
Multiple cloning site(MCS)
이 부위는 제한효소로 잘릴 수 있는 부위를 한꺼번에 모아놓은 부분이다. 제한효소로 잘라서 다른 DNA를 삽입시킬 때 중요한 부분들이 같이 잘리면 안 되기 때문에 다른 부분은 절대 잘리지 않고 이 부분에만 잘릴 수 있도록 열 몇 가지 제한효소 절단부위를 인위적으로 조작해 놓은 것이다. 이 MCS 부위는 길어야 100 - 150 bp 정도이며 앞 뒤 부분에 SP6, T3, T7 promoter 등이 붙어있게 된다. 이런 부위는 RNA를 시험관에서 만들거나 단백질 발현을 시킬 때, 그리고 DNA sequencing 같은 실험을 할 때 쓰이는 부위이다. LacZ`는 꼭 필요한 것은 아니지만 대개는 있으며 반드시 MCS(multiple cloning site)를 포함하고 있다.

참고 자료

- 생명공학실험1/ 아주대학교/ pp.18-26.

- 분자생물학/ 한국 분자생물학회 편/ pp. 201-202

- 유전자공학의 원리/ 심웅섭/ 고려대학교출판부/ pp. 88-101, 123-124

- 유전자공학입문(도해)/ 조기승/ 겸지사/ pp. 67-68.

- 미생물학 실험서/ 김종협 외 2명/ 대광문화사/ pp. 25~26

- 생명과학/ 김명원/ 라이프 사이언스/ P 209

- 미생물학 실험(환경, 생태, 해양)/ 강헌/ 동화기술/ pp. 266-267

- 유전자 크리닝 입문/ 강종백 외 2명/ 월드 사이언스/ pp. 236-248