DNA Isolation from Animal tissue

소개글

DNA Isolation from Animal tissue

목차

DNA Isolation from Animal tissue
Ⅰ. Introduction
1.1. 이론
1.2. 목적

Ⅱ. Materials and Methods
2.1. Materials
2.2. Methods

Ⅲ. Questions
3.1. PCI extraction을 설명하여라.
3.2. Ethanol Precipitation을 설명하여라.

본문내용

Ⅰ. Introduction
1.1. 이론
ATL 은 lysis buffer 로 칼슘 이온을 잡아주고, 세포간의 거리를 멀어지게 할 수 있는
EDTA 와 머리는 음전하를 띠면서 친수성이고, 꼬리는 소수성으로 미셸 구조를 형성하여
세포막을 용해시킬 수 있는 SDS가 들어있다.
AL 은 binding buffer 로 EDTA와 SDS 에 sodium salt 가 더 추가되어 있다. sodium
salt 는 DNA 와 column 의 실리카겔 사이에 약한 결합을 형성하게 하여 DNA를 고정시 켜 준다. 또한 수소결합을 파괴하여 단백질 변성을 유도한다.
AW 1과 AW 2는 washing buffer이다. washing 시 NaCl 이 함유된 Ethanol 로 하는 이 유는 Na 이온이 계속 DNA를 고정시켜서 DNA를 제외한 다른 물질들만 씻겨나가도록 하 기 위한 것이다. washing 후 증류수를 넣어주면 Na 농도를 감소시켜 DNA 고정이 약해 지기 때문에 원심분리를 통해 DNA를 얻을 수 있다.

1.2. 목적
동물의 조직에서 DNA를 분리해낸다.

Ⅱ. Materials and Methods
2.1. Materials
Animal tissue (Unknown)
Buffer (ATL, AL, AW1, AW2)
Proteinase K
Rnase (100㎎/㎖)
Ethanol (100%)
D.W
Centrifuge
Vortex

2.2. Methods
1) 25㎎ 정도의 조직을 작은 조각으로 잘라 1.5 ㎖ tube 에 넣고, 180 ㎕ 의 Buffer
ATL 을 넣어준다.
2) 20㎕ 의 Proteinase K 을 넣어주고 vortexing 으로 섞어준다. 그리고 조직이 완전히
해리될 때까지 55℃에서 보관해둔다. (1~3 시간 정도)
3) Rnase (100㎎/㎖)를 4㎕ 넣고 vortex 로 섞는다. 그리고 2분 동안 상온에서 incubate
시킨다. )15~20 ℃)

참고 자료

없음