[동물생식학 실험 리포트] 마우스 줄기세포 배양, 분화, 형질전환 실험

소개글

-mouse embryonic stem cell의 특징을 알아보고 이를 배양하고 분화시켜 형질 전환 동물을 생산할수 있는 기본적인 기법을 알아보는 실험입니다.

목차

● 마우스 배아 줄기 세포의 배양 실험
1. MEF(mouse embryo fibroblast) 의 준비 - feeder cell preparation
2. 동결 세포 해동 후 배양
3. 실험방법


● embryonic stem cell의 분화 유도 실험 - embryo body(EB)의 배양
1. 실험방법


● 형질 전환된 세포의 selection 실험
1. 형질전환 (transgenesis)
2. 형질전환동물의 생산 방법
3. 실험방법

● discussion

본문내용

   마우스 배아 줄기 세포의 배양 실험
-mouse embryonic stem cell의 특징
생쥐 배아 줄기세포는 교배 3.5일째 주머니배의 속세포덩이(배자모체, ICM)로부터 분리할 수 있다. 우선 면역수술 방법으로 영약막세포를 제거하여 속세포덩이를 분리한 후 며칠간 배양하면 군체(colony)가 형성된다. 그 후 배아 줄기세포의 군체를 분리해서 증식이 억제된 지지세포(feeder cell)위에 다시 분주하면 배아 줄기세포를 얻을 수 있다.

1. MEF(mouse embryo fibroblast) 의 준비 - feeder cell preparation
일반적으로 지지세포는 배아 줄기세포를 분리 및 계대배양을 위해 필요하다. 지지세포는 배아줄기세포의 증식에 필요한 성장인자들을 공급하여 주고 배아 줄기세포의 분화를 억제한다. 주된 분화억제요소로는 백혈병억제인자(LIF)를 이용하며 생쥐의 경우 지지세포 없이 LIF만 첨가하여도 미분화상태로 계속 증식할 수 있다. LIF는 다발현성 사이토카인(cytokine)으로 gp130 pathway에 작용하며, 이는 CNTF, OSM, IL-6 등의 사이토카인과 함께 배아 줄기세포가 다능성을 유지면서 증식할 수 있도록 해준다.
배아 줄기세포가 자연적인 분화를 억제하면서 자가증식이 계속해서 일어나게 하기위해 사용되는 지지세포는 보통 지지세포의 증식을 억제하는 mitomycin-c를 처리하거나 방사선을 조사한 섬유아세포인 STO cell 또는 생쥐배아섬유아세포를 이용한다. 배아 줄기세포는 지지세포 없이 LIF만 첨가하여도 자가 증식이 가능하지만 지지세포를 이용한 것에 비해 그 효율이 낮다. 배양배지에는 FBS를 첨가하는데 그 구성성분이 정확히 밝혀져 있지 않고 개체마다의 변이가 심하다. FBS에는 retinoid와 같은 배아 줄기세포의 분화를 일으키는 성분이 있기 때문에 배아 줄기세포의 자연적인 분화가 일어난다고 알려져 있다.

실험방법
① 수정된 후 14일령의 mouse 배아의 머리, 팔, 다리, 내장 등을 제거하여 몸통의 세포를 갈아서 feeder cell로 이용을 한다. 배아의 대부부의 세포는 fibroblast이므로 feeder cell로써 이용하는데 좋다.

참고 자료

없음