enzyme kinetics(Michaelis-Menten equation과 Lineweaver-Burk equation)

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목차

1. subject
2. object
4. materials
5. method
6. result
7. discussion
8. reference

본문내용

⑴ enzyme 10㎕에 각각의 serial dilution of substrate를 1ml씩 넣은 후, 각각의 큐벳에 넣어 10초간격으로 A408을 측정한다.
⑵ 각 기질농도에서 initial velocity(v)를 구하고, v와 [S]에 대해 plot한다.
[S]- Serial dilution of substrate의 농도
v - microphotometer에 넣으면 △A408/10sec의 값이 나온다.
이 값에 6을 곱하면 △A408/min이 나오고 이 값을 가지고
A = ℰxcxl을 이용하면 A는 알고 있는 값이고, ℰ of pNP는 1.78x104M-1cm-1 이고, l은 1cm이므로 c( /min)를 구할 수 있다.
⑶ Lineweaver-Burk plot으로부터 Km, Vmax 값을 구한다.
- Lineweaver-Burk equation으로부터, x intercept(-1/Km) -> Km( )를 구한다.
y intercept(1/Vmax) -> Vmax( /min)를 구한다.
⑷ turnover number Kcat(min-1)을 구한다.(AP의 분자량은 약 80KDa로 계산)
- Kcat = Vmax/[Et] 이므로 [Et]를 구하면 Kcat 값을 구할 수 있다.
(enzyme의 양이 적으면 Vmax도 적은 값을 가지고, enzyme의 양이 많으면 Vmax도 큰 값을 가진다.)
- 1ml의 반응액에 10㎍의 AP를 넣었으므로, 이 농도를 AP의 분자량을 활용하여 [Et] 의 몰농도를 구한다.

참고 자료

단백질 실험노트
레닌저 생화학