sds-page

소개글

-SDS-PAGE의 원리와 방법을 이해한다.
-Rm vs. Log MW의 standard curve를 그리고 정제한 단백질의 분자량을 추정한다.

목차

1.Indroduction
2.Materials and methods
3.Results
4.Discussion

본문내용

1.Indroduction
이전 실험에서 혼합된 단백질(BSA)를 정제하고 4개의 aliquot를 얻었다.(crude extract, unbound, washed, eluent) 정제된 혼합단백질을 확실히 하기 위해 SDS-PAGE에서 단백질을 분리 할 수 있다.
SDS-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)는 단백질을 정제할 때 샘플의 순도를 분석할 뿐 아니라 단백질의 분자량을 추정해 볼 수 있는 일반적인 방법이다. 이것의 장점은 분리된 단백질을 눈으로 볼 수 있고 단백질 분리의 수를 빠르게 확인할 수 있다.
전기장에서 분자의 전기적인 이동성은 분자의 크기에 대한 charge의 비율이다. :
μ=charge/mass
그리고 분자의 전기적 이동성(μ)은 마찰계수(f)에 대한 분자의 net charge(Z)이다. :
μ= Z/f
단백질의 전기영동은 일반적으로 교차 결합된 polymer polyacrylamide으로 구성된 gel에서 실행된다. Polyacrylamide gel은 무게나 분자량의 비율에 따라 단백질의 이동을 느리게 하는 여과기로 작용한다.
그러나 detergent sodium dodecylsulfate(SDS) 와 β-mercaptoethanol과 같은 reducing agent 사용시 전기영동 시스템에서 단백질의 이동성은 내재적인 charge와 관계없이 분자량에만 관계한다. 이 reducing agent 는 disulfide bond를 끊어주는 역할을 하고, SDS는 단백질에 단단히 붙어서 미셀을 형성한다. SDS에 의한 높은 음전하는 단백질에 붙어서 단백질 자신의 내재적 전하가 없어진다. SDS는 대부분에 단백질에 거의 일정한 1.4g SDS/g protein 비율로 붙는다. 그러므로 SDS 미셀 안에 있는 대부분의 단백질은 매우 비슷한 mass에 대한charge의 비율을 갖는다. SDS의 존재하의 전기영동은 대부분이 단백질의 크기에 의해서만 분리한다. 작은 단백질이 더 빨리 이동한다.

참고 자료

없음