혈청내 GOT.GTP 측정실험(Reitman Frankel법) 실험보고서

소개글

혈청내 GOT-GTP 측정하는 실험보고서 입니다.
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관련실험보고서 쓰시는 분들은 참고하세요

목차

1. Title.
혈청내 GOT.GTP 측정실험(Reitman Frankel법)


2. Introduction.
간기능검사(LFT-GOT.GPT)

간이 갖고 있는 기능은 다양하기 때문에 간기능검사란 이들 각각의 기능을 평가하는 검사들을 총칭하는 것이어야 한다. 그러나 좁은 의미로는 간기능과 관련된 일반화학검사를 가리킨다. 흔히 말하는 간기능검사라 함은 혈액검사로서 혈중 콜레스테롤, 단백질/알부민, 빌리루빈, 알칼리성 포스파타제, AST, ALT(종래의 GOT, GPT) 등을 일괄하여 측정하는 것이다.

3. Materials & Reagents
4. Procedure
5. Discussion
6. Assignment
1. 간기능 검사의 종목, mark특징-의미, OT-PT의미와 증-감소 질환들.
2. IU와 Karmen 단위의 차이.
3. 몰, 노르말-당량농도.
4. 혈청과 혈장의 차이점.
5. pipette의 종류
6. 효소


8. Reference

본문내용

Oxaloacetic acid 측정(Reitman-Frankel method)의 원리
1. Oxaloacetic acid(C=O가 함유)에 DNPH을 첨가시켜 Oxaloacetic acid와 DNPH의 축합물을 생성시킨다.
2. Ox-DNPH에 4N NaOH를 첨가하여 Quinoid-hydrazone을 생성시켜 505nm에서 비색측정한다.

Oxaloacetic acid의 UV 측정법 원리
- 생성된 Oxaloacetic acid에 NADH와 malate dehydrogenase(MDH)를 첨가하여 Oxaloacetic acid를 malate(malic acid)로 환원시키고 산화된 NAD+의 증가를 측정하는 대신에 NADH의 감소분을 340nm에서 비색 측정한다.

생성된 glutamiate(glutamic acid)의 측정(AST/ALT 공통)원리
1. 생성된 NADH(NADPH)를 340nm에서 측정하지만, NADH(NADPH)에 diaphorase와 산화형의 지시약 NBT을 첨가하여 생성된 환원형의 horumazone을 505nm에서 측정하여도 된다.

(참고)AST의 UV측정법에서의 주의점
1. Oxaloacetate를 기질로 하여 AST를 측정할 경우 NADH의 감소를 340nm에서 측정할 경우 NADH를 이용할 수 있는 반응이 시작되어 Oxaloacetate가 Oxaloacetate decarboxylase에 의해서 pyruvate가 생성된다.
2. pyruvate를 lactate로 변화시키는데 필요한 NADH를 LDH가 이용하게 되어 NADH의 감소가 더 증가된다.
3. AST가 혈중에서 검출될 만큼 liver가 손상되었다면 liver에서 Oxaloacetate decarboxylase와 LDH도 혈중에 증가하게 된다.
4. NADH를 이용할 수 있는 혈중의 효소는 malate dehydrogenase와 LDH가 있는데, AST UV 측정법에서는 malate dehydrogenaserk NADH를 이용하는 실험계이기 때문에 LDH도 NADH를 이용하게 되면 결과적으로 NADH의 감소량이 더 증가한다. 이와같은 (+)에러를 피하기 위해 Oxaloacetate를 기질로 하는 실험계에 먼저 NADH를 이용하는 LDH를 첨가하여 LDH가 NADH를 완전히 NAD+로 전환시킨 다음 malate dehydrogenase를 첨가하는 것이 바람직하다.

4. Procedure
1. 튜브2개에 기질액 각각 1ml 넣는다.
2. 37°C에서 5분간 방치.
3. 측정할 혈청을 각각 0.2ml 넣는다.

참고 자료

없음