Hplc 조작시 발생하는 문제점과 그에 대한 해결책
- 최초 등록일
- 2008.04.23
- 최종 저작일
- 2007.10
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소개글
Hplc 조작시 발생하는 문제점과 그에 대한 해결책에 대해 설명해 놓은 자료입니다.
목차
Hplc Trouble shooting
1. 컬럼의 문제점 판단 기준
가. 압력에 의한 증상 판단
나. 피크 모양의 이상
2. Pump의 Troubleshooting
가. RT가 맞지 않는 경우
3. UV/Vis Detector의 Troubleshooting
4. Peak Troubleshooting
5. Signal to Noise Ratio
*** 증상에 따른 Trouble Shooting 및 Column Washing ***
정량분석 불량(Peak Area 재현성 불량)
Baseline Noise & Drift
감도불량
No Peak
Peak가 작아짐
앞쪽 Peak 넓어짐
모든 Peak가 넓어짐
Peak 갈라짐
Peak 앞쪽 비대칭
Peak Tailing
Peak 끝 부분이 뭉툭하게 되는 증상
Negative Peak
본문내용
Hplc Trouble shooting
1. 컬럼의 문제점 판단 기준
- 압력(Pressure)
- 피크 모양(Peak Shape)
- 머무름 시간(Retention Time)
가. 압력에 의한 증상 판단
1. 증상 - High Pressure(주된 문제점 - Frit 막힘, 컬럼 오염, 충진물 막힘)
2. 조치사항
① 확인 방법 - 컬럼 제거 전 후 압력 확인
② 만일 컬럼에 압력이 많이 걸리는 경우
- 컬럼 세척 - 컬럼 오염 물질과 막힌 입자 제거, 고분자 물질과 흡착된 물질 제 거, 시료나 버퍼 침전물 제거
- 역방향 세척 - frit 막힘 해결
- frit 교체 - frit 막힘 해결
3. 역상 컬럼 세척 방법
① Buffer salts 가 제거된 이동상
② 100% Methanol
③ 100% Acetonitrile
④ 75% Aectonitrile : 25% Isopropanol
⑤ 100% Methylene Chloride*
⑥ 100% Hexane*
*각 단계별로 최소한 25ml 이상 사용
4. 순상 컬럼 세척 방법
① 50% Methanol : 50% Chloroform
② 100% Ethyl Acetate
* 각 단계별로 최소한 50ml 이상 사용
5. Frits 교체 방법
6. 압력 증가를 막는 방법
① 컬럼 보호 장치 사용 - Guard column, In-line filter
② 시료 여과
③ 적절한 컬럼세척
④ 이동상 여과
나. 피크 모양의 이상
- 피크 쪼개짐(Peak split)
- 꼬리끌림(Peak tailing)
- 띠넓어짐(Broadening)
- 분리능 저하
*피크 모양 문제의 많은 경우 복합적으로 나타남(예-띠넓힘과 꼬리끌림 , 꼬리 끌 림과 머무름 시간 증가)
참고 자료
없음