Gel exclusion Chromatofraphy

소개글

이번 실험은 혼합물의 성분을 분리하고 정량 하는데 쓰이는 Chromatography방법 중에 하나인 Chromatography중 gel exclusion chromatography를 이용하여 단백질을 분리하는 것이다. 서로 분자량이 차이 나는 Lysozyme과 BSA를 resin으로 채워진 column을 통과시킨 후 UV Spectrophotometer로 O.D값을 280에서 측정하였다. 하지만 두 개의 peak가 측정되었어야 하였지만 1개의 peak만을 관찰할 수 있었다. 초기 Void volume 제거 시 BSA가 같이 씻겨 내려간 것으로 추정 된다.

목차

1.Abstract
2.Introduction
Chromatography
Gel exclusion Chromatography
Ion change Chromatography
Affinity Chromatography
3.Materials & Methods
4.Data & Result
5.Discussion
6.Reference

본문내용

이번 실험은 분자 크기에 따라 물질을 분리하는 gel exclusion chromatography를 이용하여 단백질(BSA와 Lysozyme)을 분리하는 것이었다. Buffer와 단백질을 섞은 sample을 resin이 채워져 있는 column에 넣고 test tube 60개에 9방울(약 0.5ml)씩 떨어뜨린 후 각 test tube의 흡광도를 280nm에서 측정하였다. 측정 결과 60개의 tube중 34번째 tube(17.0ml)에서만 peak가 나타났다. 2개의 단백질이 분리되면 2개의 peak가 나타났어야 했는데 1개만 분리된 것으로 측정이 되었다. 이는 먼저 단백질의 유무를 생각해 볼 수 있다. 단백질 혼합 과정에서 BSA와 Lysozyme중에서 하나가 빠진 채 sample이 준비된 것이다.
일반적으로 약 10~20번째 정도의 tube에서 분자량이 더 큰 BSA(66kDa)이 분리가 되고 약 30~40번 정도의 tube에서 분자량이 더 작은 sample인 Lysozyme(14.4kDa)이 분리가 되어 2개의 peak가 관찰 되었어야 했다....

참고 자료

한국생화학회, 실험 생화학 1st , 1997년 , 탐구당, p74, p85, pp88~91
Nelson, Cox, Lehninger Biochemistry 4th , FREEMAN , pp89~92