Plant cell로부터 Total RNA정제

소개글

Plant cell로부터 Total RNA정제입니다.

목차

1 . 실 험 목 적
2 . 실 험 원 리
3 . 실 험 재 료
4 . 실 험 방 법
5 . 예 상 결 과
7 . 참 고 문 헌

본문내용

❖ RNA의 특징
디옥시리보오스 대신 리보오스, T 대신 U, DNA는 double strand인 반면 RNA는 single strand이다. (몇몇 virus에서는 다르다.)
대부분의 RNA는 single strand DNA와 구조적으로 유사하다.
RNA 사슬이 스스로 접혀서 100ㅔp를 형성하거나 hairpin 구조를 형성하기도 한다. RNA strand의 nucleotide sequence를 1차구조, 염기쌍 형성패턴을 2차구조, 3차원에서의 분자구조를 3차구조라 한다.
RNA는 세포내에서 단백질과 결합되어 있으며 그들간의 친화력은 매우 강하므로 단백질을 얼마나 제거하느냐가 RNA의 순도를 결정하게 된다. 단백질을 제거하기 위해 페놀 추출, proteinase K에 의한 단백질의 분해 및 강력한 denaturant인 guanidinium을 이용한 추출방법과 이들간의 조합등 여러 가지 방법에 의해 RNA를 추출한다.
연구 목적에 따라 세포 전체 RNA혹은 polysomal RNA등이 이용된다.
❖ RNA추출 시 주의사항
− RNase에 의해 분해되지 않고 완전하게 얻는 것
− 단백질이 제거된 순수한 RNA를 얻는 것
− 주위환경으로 부터의 RNase 오염 방지
− RNA 실험용 시약과 용기는 DEPC처리, 멸균, 180℃ 로 구워야한다.
− heirpin이나 RNase는 ribonuclease의 강력한 저해제이며분해되지 않는RNA를 얻는데 매우 유용하다.
− 작업 시 polyglove 착용. (손으로부터의 RNase 오염 방지)
− 세포 자체로부터 RNase 오염 방지
− 시료는 -70℃에서 보관.
✰ RNA 분리
RNA 분리의 주요 목적은 유전자 발현기작을 분석하는데 있다. 유전자 조절의 원리를 밝히기 위해서는 RNA의 구조, 양, 크기 등을 상세히 분석하는 것이 필요한데, 이런 분석은 S1분석, primer extension, northern blot 등의 실험을 통해 알 수 있다. S1분석, primer extension

참고 자료

➀ 전병균 외 4명 2002 현문사 진단 분자생물학
➁ 이대실 KIST 생명공학 연구소 분자생물학 노트
➂ 두산세계대백과사전