TEM(투과전자현미경)과 SEM(주사전자현미경)의 시료 제작

소개글

투과전자현미경과 주사전자현미경의 시료제작 과정을 상세히 기술한 리포트입니다.

목차

1. 기본적인 TEM(투과전자현미경)과 SEM(주사전자현미경)의 시료 처리 순서
△ TEM(투과전자현미경)
△ SEM(주사전자현미경)
2. TEM (투과전자현미경) 시료제작
I. 조직 채취 (Sampling)
II. 고정 (Fixation)
III. 탈수 (Dehydration)
IV. 포매 (Embedding)
VI. 전자염색 ( Staining)

▶ 사 진 작 업 (Photography)
I. 현상액 (Developer)
II. 정지액 (Stop bath)
III. 정착액 (Fixer)
IV. Film 현상 (Development)
V. 인화 (Printing)
2. SEM (주사현미경)의 시료제작
I. 조직채취(Sampling)
2) 고정액 (fixative)의 선택
3) 완충액(buffer)의 사용
4) 고정액의 온도 및 시간
5) 고정액 사용시 주의 사항
III. 탈수(Dehydration)
IV. 건조(Dry)

본문내용

2. TEM (투과전자현미경) 시료제작

I. 조직 채취 (Sampling)

1) TEM 조직이든 SEM 조직이든 가급적 작게 채취하는 것이 좋다. 특히 TEM 에서는 1x1x1mm 정도로 작게 하는 것이 좋다.
2) 방향성이 요구되는 경우에는 1x1x2mm 정도로 한쪽 방향을 약간 길게 하여야 후에 embedding 과정에서 포매 하기가 용이하여진다. (skin, nerve등)
3) 조직을 채취하는데 시간이 오래 걸리거나, 고정이 잘 안되는 조직은 perfusion 한 후 채취한다.
4) 실험동물을 사용 시에는 마취 후 살아있는 상태 하에서 필요 부분을 잘라낸다.
5) 신속히 고정액에 담아야 한다.

II. 고정 (Fixation)

1) 고정의 목적

1. 고정이란 세포의 autolysis를 방지하고 세포성분의 응고 및 경화 시키는 것이다.
2. 세포의 구조가 살아있는 상태에서의 변화를 최소화시켜서 잘 보존시킨다.
3. 탈수 과정 및 후에 전자 beam 에 노출되었을 때 조직을 보존하기 위함이다.

2) 고정액 (fixative)의 선택

1. 이상적인 고정액은 조직의 수축 또는 팽창 등의 변화를 최소화하며 빨리 조직 내에 침투하는 고정액이다.
2. 전 고정에는 aldehyde 계통은 2% 정도의 paraformaldehyde fixative나 2%정도의 glutaraldehyde fixative가 많이 사용된다.
3. TEM 조직 고정에는 glutar. fixative 단독으로 사용하거나 paraform.과 glutar. 혼합 fixative를 많이 사용한다.
4. SEM 조직 고정 시는 glutar. fixative 만을 사용하는 경향이 많다.
5. 후 고정에는 중금속인 1% OsO4를 사용하여 조직을 더욱 안정시키고 전자밀도(contrast)를 증가 시킨다.

3) 완충액 (buffer)의 사용

1. 고정액의 pH와 삼투압을 조절하기 위하여 완충액을 사용함. (pH 7.2 - 7.4)
2. 전고정과 후 고정 사이에서 이들 고정액들 간의 화학적 반응을 방지하기 위하여 고정액에 사용된 같은 buffer 로 세척을 한다.
3. 후고정후에도 과도한 fixative 의 제거 및 고정액과 탈수제 사이의 반응을 방지하기 위하여 세척을 한다.
4. Buffer 에는 phosphate, cacodylate, veronal acetate buffer외 많은 종류가 사용되나 통상 phosphate 나 cacodylate buffer가 많이 사용된다.

참고 자료

없음