[생물]포유동물의 핵형분석

소개글

동물의 종에 따라 서로 다른 핵형을 지닌다.
이 레포트에서는 핵형의 정의와 핵형 분석에 필요한 방법 등을 싣고 있습니다.

목차

I. Introduction
1. 포유동물의 핵형분석
2. 염색체 표본 제작의 기본
3. 표본 제작 방법
Ⅱ. References

본문내용

① 말초혈액 10ml정도 채혈하여 heparin으로 항 응고 시킨 뒤, 0.1ml의 phytochem- agglutinin(PHA)를 첨가하여 4℃에서 1시간 동안 방치하고, 1000rpm에서 1분간 원심 분리하여 백혈구를 포한한 혈장을 분리한다. 여기에서 PHA는 red kidney bean에서 추출한 물질로서 유사분열 자극제이며 적혈구를 응축하는 작용을 한다.
② 분리한 백혈구 부유액 1ml를 조직배양 배치(tissue culture medium; 그 중에 예로서 RPMI 1640배지 8mol의 우태아혈청 1ml)에 주입하고 PHA 0.1ml를 다시 첨가하여 37℃에서 72시간 배양한다.
③ 배양 후 약 70시간에 colcemid 또는 colchicine를 배양액 ml당 0.4㎍을 첨가하고 약 2시간을 추가 배양한다. colcemid는 방추사의 작용과 동원체의 분리를 억제한다.
④ 500rpm으로 원심 분리하여 배양액을 버리고 세포만 모아서 1% sodium citrate 저장액 10ml에 약 15분간 처리한다.
⑤ 다시 500rpm으로 3분간 원심 분리하여 세포만 모아서 methanol과 glacial acetic acid를 3:1로 혼합한 용액으로 15분간 고정하는 것을 몇 번 반복한다.
⑥ 고정한 시료를 이미 탈지한 슬라이드 글라스 위에 파이펫으로 2~3방울 떨어뜨려 화염건저법으로 표본을 제작하는데 화염이 깨진 후 수평으로 흔들어 세포를 파괴한다. 다음에 Giemsa 액으로 염색하여 커버 글라스를 덮고 약 1000배 배율의 현미경으로 검경 한다.
⑦ 제작된 표본은 중기의 염색체를 나타내는 세포를 택하되, 가능하면 염색체가 겹치지 않을 세포를 골라서 관찰하고 염색체를 촬영하여 인화한 후 각 염색체를 재단하여 핵형(karyotype)을 작성한다.

참고 자료

1. 한국유전학회, 유전학실험, 아카데미서적, 1994, pp147-150
2. 김영설, 유전자 진단의 이론과 실제, 한의학, 1999, p115
3. Rovert F. weaver, 박상대, 분자생물학, 라이프사이언스, 2000, pp165~166