[단백질 공학]Insect cell culture and protein expression (곤충세포 배양과 단백질 발현)

소개글

insect cell을 이용한 단백질 생산
현재 Baculovirus를 이용한 재조합 단백질의 생산에는 인시류 세포인 Sf와 T.ni 세포가 주로 사용된다. insect cell을 배양할수 있고 단백질을 생산할 수 있도록 기본적인 실험에 대하여 주의 사항과 실험방법을 설명하였다.

목차

1. introduction.
2. medium 제조
3. cell plating
4. cell maintaining
5. cell storage
6. transfection
7. conditional expression

본문내용

Insect cell culture methods
1950년대 Wyatt는 곤충 체액과 유사한 성분으로 아미노산, 유기산, 당, 무기염등에 열처리한 누에체액을 섞어서 최초의 곤충세포 배양 배지를 만들었다. 이후 Grace는 이 배지에 10개의 수용성 비타민과 삼투압을 증가시키기 위해 sucrose를 더 첨가하여 배지를 만들었는데 이 배지를 지금까지 곤충세포를 배양하는데 가장 많이 사용하고 있다.
Insect cell을 배양하기 위해서는 이 배지에다 FBS (fetal bovine serum)나 FCS (fetal calf serum)을 첨가해야만 한다. 이 첨가 성분의 기능은 명확히 알려져 있지는 않지만 성장 증진 작용, 영양분의 공급, 산화나 독소로부터 세포를 보호하는 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나 고가의 serum은 배지 가격을 상승시키고, 복잡한 성분으로 되어 있어서 재조합 단백질의 정제를 어렵게 할 뿐 아니라, 생산되는 과정마다 성분 차이가 있어서 실험을 할 때마다 다른 결과를 초래할 우려가 있다. 또한,virus 등에 오염될 가능성이 많은 것 등 여러 단점들이 나타나고 있어, 이로 인해 무혈청 배지를 개발하는 노력이 계속되고 있다
Cell culture를 하기 위해서는 무엇보다도 cell이 오염되지 않도록 하는 것이 중요하다. 따라서 culture room을 따로 마련하고 clean bench 및 culture incubator 등 고가의 장비들을 갖추어야 하며 또한 이런 시설들을 청결하게 유지해야 하는 어려움이 있다.

참고 자료

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