[세포생물학]Electrophoresis of gemnomic DNA

소개글

전기영동의 종류 특징 및 전기영동에 의한
DNA의 농도 확인

목차

Introduction

① 전기영동 (Electrophoresis)
② 핵산 전기영동에 영향을 주는 인자
③전기영동의 종류
Materials
Method
Result
Discussion
*References*

본문내용

이번실험은 DNA를 전기영동시켜 농도를 알아보는 실험 이였다.
Agarose gel의 농도는 0.8%로 맞춰주어서 전기영동을 했다. Agarose gel이 굳으면 electrophoresis kit 에 gel을 넣어 0.5X TBE buffer에 충분히 잠기도록 한다. 여기서 들어가는 buffer의 종류는 TPE, TBE, TAE buffer가 존재한다. 일반적인 특징을 보면 TAE 는 resolution이 좋으나 capacity가 적고, TPE나 TBE의 경우는 resolution 이나 capacity 양면에서 좋은 편에 속한다. 0.5X TBE buffer는 완충작용을 위해 사용한다.
6× loading buffer는 sucrose성분이 있어서 DNA에 무게감을 주고 전기영동한 후 발색을 하여 눈으로 관찰할 수 있게 한다. 6× loading buffer는 DNA를 염색시키는 것은 아니고 단지 DNA와 염색약을 섞어준 것이다.
6× loading buffer를 적당량 덜어 놓고 피펫으로 딴 DNA를 천천히 섞어준다. 만들어 놓은 gel에 홈을 찾아서 미리 피펫으로 깊이를 확인한 후에 6× loading buffer와 섞어준 DNA를 넣어준다. 아무처리도 하지 않고 DNA를 볼 수 없기 때문에 EtBr을 처리해주는데 EtBr을 넣는 방법은 두가지방법이 있다. gel을 EtBr에 담그거나 gel을 만들 때 EtBr을 넣어서 만드는 방법이 있는데 우리는 후자를 사용했다. EtBr는 DNA에 이중나선에 삽입되어 UV에 노출시 형광을 나타내는 물질로 이를 통해 DNA의 위치확인 및 정량을 할 수 있다.(DNA와 붙어있을 때와 그렇지 않을 때의 UV에 대한 fluorecence의 life time의 차이가 있기 때문)
gel의 홈에 DNA를 넣고 전기영동하려면 버퍼에 충분히 잠기도록 넣어주어야 전류가 잘 통하여 전기영동이 잘 이루어진다. 우리는 genomic DNA말고도 plasmid DNA와 marker를 같이 전기영동 해줬다. plasmid DNA는 환형구조의 DNA로 유형에 따라 이동속도가 달라질 수 있다. 한 플라스미드는 대부분 슈퍼코일인 이중나선이 더 꼬여있는 형태로 존재한다. 이런 DNA가 전기영동이 가능한 이유는 DNA의 구조가 약간 음전하를 띠고 있기 때문이다. DNA가 음전하를 가지는 이유는 DNA를 구성하는 인자중 하나인 인산이 음전하를 가지기 때문이다.

참고 자료

1) James,D,watson 저, 고상권외 13인역, 1991, 유전자의 분자생물학(4), 탐구당, pp.356~pp.360
2) 카이지 에이지 저, 정해영 역, 2001, 신분자유전학, 신일상사, pp.215~217