[생화학실험]단백질을 이용한 Bradford와 Lowry method

소개글

각 실험에 대한 원리와 이론, 방법 등의 설명이 상세히 되어 있습니다.

목차

Ⅰ. Introduction
⒈ 단백질(protein)
⒉ 단백질의 종류
⑴ 단순단백질(simple protein)
⑵ 복합단백질(conjugated protein)
⑶ 유도단백질(derived protein)
⒊ 실험원리
⑴ 단백질의 정량
⑵ Bradford 법
⑶ Lowry 법
⑷ Bradford와 Lowry method의 차이점
Ⅱ. Material
Ⅲ. Method
Ⅳ. Result
Ⅴ. Discussion
< 단백질 종류에 따른 정량법 >
⒈ 조단백질의 정량
⑴ Macro - Kjeldahl법
⑵ Micro - Kjeldahl법
⒉ 순단백질의 정량
⁃ Barnstein법
⒊ 우유 중 카제인의 정량법
⑴ 공정법
⑵ 잠정법
⒋ 아미노산 적정법
⑴ 원 리
⑵ 시약 및 기재
⑶ 실험방법
Ⅵ. Reference

본문내용

Ⅰ. Introduction
⒈ 단백질(protein) : 모든 생물의 몸을 구성하는 고분자 유기물.
수많은 아미노산(amino acid)의 연결체이다. 천연아미노산에는 20종류가 있는데, 이 아미노산들이 펩티드 결합이라고 하는 화학결합으로 서로 연결되어 길게 연결 된 것을 폴리펩티드(polypeptide)라고 한다.
⒉ 단백질의 종류
⑴ 단순단백질(simple protein)
= α-아미노산만으로 이루어진 단백질이다. 가용성 단백질과 불용성 단백질로 크게 구별된다.
⑵ 복합단백질(conjugated protein)
= 단백질의 분류 상 이름으로 아미노산만으로 된 단순단백질에 다른 유기 화합물 또는 원자단이 결합된 단백질이다.
⑶ 유도단백질(derived protein)
= 단백질이 열, 기타 반응으로 가수분해 도중 생성 된 분해 산물
⒊ 실험원리
⑴ 단백질의 정량
일정량의 시료를 물에 침전시켜 비단백질형태 질소화합물을 용해시키고, 동시에 침출된 단백질을 침전제를 가하여 침전시킨 후 여과하여 비단백질형태 질소화합물을 제거한다.
⑵ Bradford 법
산성용액에서 Coomassie brilliant blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대 흡광도(λmax)는 465㎚에서 595㎚로 이동하게 된다. 따라서 595㎚에서 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다. 이 방법은 발색반응이 2분 이내에 완결되며, 1시간까지 안정성이 유지된다. Bradford 방법의 감도는 Lowry 방법보다 좋으며, 미량정량법(microassay)을 사용하면 1~20㎍의 단백질량을 측정할 수 있다. Bradford 방법은 빠를 뿐만 아니라 비단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없다.
⑶ Lowry 법
이 분석법은 용액에 있는 단백질뿐만 아니라 건조된 시료에도 이용될 수 있다. 특히 이 정량방법은 5㎍/㎖ 정도의 단백질의 양을 정량할 수 있는 대단히 민감한 방법이어서 널리 쓰이고 있다. 이 방법에서 사용하는 Folin-Ciocalteau 시약에 의한 Biuret 실험에서와 마찬가지로 단백질과 알칼리성 구리와의 반응에 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판들에 의한 환원 반응으로 생긴다.
⑷ Bradford와 Lowry method의 차이점
Bradford 정량방법은 Coomassie Blue G 염색약이 단백질과 결합함으로서 생기는 파장의 변화를 측정하는 것이다. 장점으로는 정량시간이 매우 빠르고 간단하다는 데 있다. 그러나 단백질이 아닌 다른 것들 Detergent, 지방 등에 의해 간섭을 많이 받는 단점이 있으며 단백질마다 Coomassie Blue G 염색약과 결합하는 정도가 조금씩 다를 수 있는 단점이 있다. Lowry 방법은 단백질의 아마이드 결합에 의한 구리이온의 환원을 토대로 측정하는 방식이다(Cu2+ --> Cu1+). 따라서 위 Bradford 방법보다는 단백질간의 차이가 거의 없는 정확도를 보여준다.
and so on

참고 자료

• 생화학 실험 / 최병법, 방병호, 방선권 공저
• 신판실험생화학 / 한국생화학회 교재편찬위원회 / 탐구당
• 생화학 실험 프린트
• http://phys.kyungwon.ac.kr