[미생물학] 미생물순수분리

목차

1. Introduction
평판법에 의한 순수배양의 분리
액체배지에서 순수배양의 분리
이원배양
2. Reference

본문내용

미생물은 널리 산재하고 있으므로 순수배양을 하기 위해서는 자연계의 혼합미생물군으로부터 원하는 미생물을 분리하는 것뿐만 아니라 인위적 환경에서 다른 미생물들의 접근을 방지하여 분리한 균주와 그 후손들을 유지, 보존하는 것이 필요하다. 미생물은 증식을 위해 많은 공간을 필요로 하지 않는다. 따라서 인위적 환경은 제한된 시험관, 플라스크 혹은 페트리 접시내에서 조성 될 수 있으며, 이러한 3가지 종류의 용기가 미생물배양에 널리 사용된다. 배양용기는 처음에 멸균(살아 있는 미생물이 없어야 한다)되어야 하며, 원하는 종류의 미생물을 접종한 후에도 계속되는 외부의 오염으로부터 보호되어야 한다. 외부로부터의 오염의 주요원천은 공기인데, 공기중에는 항상 떠다니는 미생물들이 많다. 뚜껑이 있는 페트리접시는 공기오염을 방지할 수 있도록 특별히 제작된 것이다. 시험관 및 플라스크의 오염은 적당한 마개로 입구부분을 막음으로써 방지될 수 있다. 이러한 마개로는 현재 금속뚜껑이나 플라스틱의 나사뚜껑이 특히 시험관의 경우 많이 사용되지만 전통적으로는 솜마개가 널리 사용되고 있다.
물론 배양용기의 외부표면도 오염되기 쉬우며, 플라스크나 시험관의 내부도 물질을 집어넣거나 제거하기 위해 여는 경우에 오염될 수 있다. 이러한 위험은 마개가 제거된 후 즉시 마개를 다시 끼울 때 입구부분을 불에 통과시킴으로써 극소화시킬 수 있다.
접종원(배양용기에 접종하기 위해 사용되는 미생물)은 보통 사용직전에 빨리 불로 멸균한 백금침이나 백금이를 이용하여 접종한다. 액체배양액은 피펫을 이용하여 옮길 수 있다. 이렇게 하기 위해서는 피펫의 입구 끝부분을 솜으로 막고, 사용할 때까지 내부와 외부의 오염을 방지하도록 피펫을 종이로 싸거나 유리 또는 금속용기에 넣어서 멸균시켜야 한다.
우연한 오염의 위험은 밀폐된 무균상자나 후드에서 세균을 옮겨줌으로써 더욱 감소시킬 수 있다.

평판법에 의한 순수배양의 분리

고체배지상에 명확한 콜로니들을 형성하는 미생물들(예:효모, 대부분의 세균, 다수의 곰팡이와 단세포성조류)의 순수배양은 평판법의 한 변법으로 가장 간단하게 얻을 수 있다. 이러한 방법은 한천이나 다른 적당한 응고제를 사용하여 굳힌 영양배지의 내부나 표면 위에서 개개의 생물들을 분리하여 고착 시키는 것이다. 각각의 살아 있는 미생물들은 증식하여 콜로니를 형성하며 이는 쉽게 옮겨질 수 있다.
도말평판은 일반적으로 가장 유용한 평판법이다. 멸균한 백금이를 적당히 희석한 미생물현탁액에 넣은 뒤 굳은 한천배지 위에 일련의 평행하고 중복되지 않는 선을 그어 도말한다. 접종원은 반복되는 도말에서 점진적으로 희석되어 처음에 도말한 부위에서는 합쳐진 상태로 자란다 하더라도 뒤에 도말한 부위에서는 잘 분리된 콜로니들이 그어진 선을 따라서 자라게 된다.

참고 자료

- Mark. L Wheeis, 최신미생물학, 아카데미, 1993,
- 미생물학 실험교재 편찬위원회, 미생물학 실험, 월드 사이언스,