[세포생물학] Extraction of genomic DNA

소개글

세포생물학 디엔에이 추출에 대한 리포트입니다.

목차

1. Introduction
2. Method
3. Discussion
4. Reference

본문내용

Ⅳ. Discussion

이번 실험은 게놈 DNA를 추출해내는 실험이었다. 게놈 DNA는 긴 이중사슬(107~108)로서 세포의 핵 내에 존재하고 있다. 세포는 핵산 이외에 많은 종류의 물질로 구성되어있는데 이들은 생화학적 실험에 장애가 되거나 최소한 불필요하기 때문에 가급적 제거하고 DNA만을 순수하게 회수해야 한다. 게놈 DNA의 추출에 있어서는 어떤 방법으로 파손시키지 않고 추출해서 어떻게 정제도가 높은 것을 얻는지가 중요하다.
DNA를 추출하는 방법에는 유기추출, 무기추출 및 킬레이팅 레진을 사용하는 방법이 있다. 우리가 실험에서 사용한 방법은 유기추출로서, DNA를 추출하는 방법은 다음과 같다.
게놈 DNA의 추출은 먼저 세포를 용해하고 세포내의 DNA를 가용화해야 한다. 이를 위해 -70℃에서 급속 냉각한 식물체의 잎을 homogenize(균질화)한다. 실험에 사용한 식물체의 잎은 배추잎이었다. 65℃ pre-warmed extraction buffer를 700㎕를 첨가한다. pre-warmed extraction buffer에는 Tris, NaCl, EDTA, SDS가 들어있다. Tris는 DNA가 파손되지 않게 완충작용을 하고, NaCl은 핵산과 결합하여 DNA를 안정화시킨다. 또, EDTA는 DNA의 분해 효소인 DNase를 불활성화 시켜 DNA를 보호하고, SDS는 계면활성제의 일종으로 핵막과 세포막 등을 파괴하여 세포내의 DNA를 가용화 하는 역할을 한다. 65℃ pre-warmed을 하는 이유는 이 온도에서 activity가 가장 좋기 때문이다. 실험을 지체하면 급속냉동한 배추잎이 녹아서 DNA의 추출이 어려워지므로 실험은 신속하게 이루어져야한다. 다음에는 RNase A(100㎎/㎖) 7㎕를 첨가하여 용액 중에 혼재하고 있는 RNA를 분해, 제거하고, 65℃에서 5분 incubation한다. 이 용액에 chloroform을 570㎕ 첨가하는데, 유기용매인 chlorofome은 DNA 용액 중의 단백질을 변성시켜서 제거하고, 지질제거에도 효과적이다. Chlorofome은 유기용매이기 때문에 pipet으로 용액을 채취할 때 흐를 수 있으므로 천천히 용액을 따아야한다.

참고 자료

카지이 에이지, 신분자유전학, 도서출판 신일상사, 2001
DNA프로필연구회, 유전자감식, 2001, 탐구당