Basic DNA manipulation

목차

1. 실험 제목

2. 실험 일자

3. 제출자 및 공동 실험자

4. 목적

5. 원리
1) Plasmid란?
2) Plasmid 분리하기
3) 자외선 흡광도에 의한 DNA 농도 특정

6.방법
1) Alkaline lysis 방법에 의한 plasmid DNA의 분리
2) 분리된 DNA의 정량

7. 결과

8. 고찰

본문내용

우리 실험에서처럼 DNA backbone 에는 phosphate 가 존재하므로 Na+ 이온을 첨가하여 전하를 중화시킨 경우 DNA 침전이 더욱 쉽게 이루어진다. 조교님께서 숙제를 내주셔서 생각해 보았는데, 염기가 이루고 있는 수소 결합은 아무래도 hydophilic한 성질을 띌 것같다. 그러나 첨가해준 EtOH와 같은 유기 용매는 hydrophobic한 성질을 띄기 때문에 둘이 서로 다른 성질을 띄게 되고, 이로 인해 hydrophobic한 성질을 띄는 염기들이 서로 attraction을 해서 DNA가 엉김이 일어나 침강이 일어나는 것이 아닐까 하는 생각이 든다.다음 단계에서는 70%EtOH를 첨가해주었는데, 이 과정은 불순물을 씻어내는 과정이었다. 그후, pellet에 TE 용액을 첨가했다. 이때 RNase를 첨가했는데, 우리가 얻은 pelle에는 DNA외에 RNA도 포함되어 있기 때문이다. DNA의 순도를 높여주기 위해 RNase를 첨가해준다. 이때. 온도를 37℃로 맞춰주는데 이는 RNase가 enzyme이므로 그 activity가 생체의 온도인 37℃부근에서 최대이기 때문이다. 마지막으로 TE용액을 첨가해 주었는데, 이것은 앞서 설명한 바와 같이 Water에 DNA를 넣어주면 점점 pH가 떨어져 DNA에 손상이 올 수 있기 때문에 넣어주는 일종의 Bufferdyddor이다. 다음 실험은, UV spectrophotometer를 이용하여 우리가 얻은 plasmid의 순도를 측정하는 것이었다. 실험결과에서 ratio가 1.987로 순도가 매우 높은 것으로 나타났다.

참고 자료

네이버 백과 사전
생화학 (형설출판사, 김명순 1999.)
생화학 (Biochemistry. Frank B. Armstrong . 1992.)
킴볼생화학 (John W. Kimvall 탐구당. 1996. )
Biology (Neil.A. Campbell 제 4판 )
Hightop 생물Ⅱ