[원핵생물학실험레포트] PCR (Polymerase Chain Reaction)

목차

1. 실험 제목
2. 실험 날짜
3. 실험 목적
4. Materials
5. 실험 방법
6. 실험 원리
7. 토론 및 결과

본문내용

1. 실험 제목
: ․ PCR (Polymerase Chain Reaction)
․ Agarose gel electrophoresis of PCR products
2. 실험 날짜
:
3. 실험 목적
: ․ 이미 뽑아 놓은 방선균의 genomic DNA를 templete DNA로 하여 일부 GENE를 PCR 시킨다.
․ DNA는 구조상 (-)chare를 띠는 phosphate group을 가지고 있다.
그리고 agarose gel에 DNA를 loading하면 DNA size에 따라서 band가 분리된다.
이 두가지 성질을 이용하여 E.coil에서 prep.한 plasmid DNA를 확인할 수 있다.
6. 실험 원리
- PCR (Polymerase Chain Reaction)
DNA의 양쪽 가닥을 Template로 하여 원하는 DNA를 증폭시키는 방법으로 Genomic DNA로부터 원하는 DNA 부분을 선택적으로 증폭시켜 Agarose gel 또는 Polyacrylamide gel을 이용하여 Band를 확인하게 된다. 여기에는 (1) DNA denaturation (2) Annealing (Primer의 결합) (3) Extension (DNA 합성)과 같은 세 단계의 과정이 필요하다. Double strand로 되어 있는 Template를 고온(95도)에서 Denaturation시키고, 변셩된 Single stranded DNA에 Primer를 낮은 온도(50-65도)에서 결합 시킨 뒤 (Annealing), 72-75도 에서 Polymerase가 Primer로부터 DNA를 합성하는 세가지 단계를 반복적으로 기계를 이용하여 시행함으로써 증폭된 DNA를 얻게 된다. 이때 사용되는 Polymerase는 고온에서 번식하는 Taq (Thermus aquaticus)와 같은 세균의 DNA Polymerase를 이용한다.

참고 자료

없음