[생명공학실험]plasmid DNA prep 과 전기영동

소개글

실험이 자세히 설명되어있고 토의 부분에 오류의 원인을 철저히 분석해 놓았습니다...
많은 도움이 되실 것입니다.

목차

1.실험날짜
2.조
3.실험목표
4.실험방법
5.실험결과
6.실험결과에 따른 토의

본문내용

4. 실험 방법
① cell down
- 4000rpm, 5min, 4℃
② cell만 남기고
-PI : 4.5ml
-PⅡ: 9ml : inversion
-pIII : 6ml : ice에서 15min 반응
③ 원심분리 : 14000rpm, 15min, 4℃
④ isoprophanol : 560ul --> mix
⑤ 원심분리 : 14000rpm, 15min
⑥ sup 버리고 알콜(70%, 700ul)로 washing -->14000rom, 10min, 4℃
⑦ vaccum 30min
⑧ pellet을 Rnase(20mg/ml -->30ul)가 들어간 TE buffer 3.5에 녹임
⑨ 5 tube에 CsCl을 2.83(정확히!!)을 넣은 후 TE buffer에 녹아있는 DNA와 합친다.
--> inversion
⑩ EtBr 30을 넣고 inversion
⑪ ultra tube에 옮긴 후 --> ultracentrifugation!!!(90000rpm, 20hr, 15℃)
⑫ 전기영동 buffer solution(TEA)에 1%가 되도록 agarose를 섞는다.
⑬ 전자렌지에서 2-3분 가량 열을 가한 후, 상온에서 굳지 않을 정도로 식힌다.
⑭ EtBr(Ethidium bromide)을 20ml 당 1ul가 되도록 섞는다.
⑮ 준비된 agarose gel 용액을 주형에 부어 식힌다.
-sample buffer와 DNA를 섞어 loading 한다.(100V)
5. 실험 결과
<그림1> 전기영동의 결과
사진에서 보는 것과 같이 ①~⑥번 모두 눈으로 뚜렷하게 확인할 수 있는 2개

참고 자료

없음