[플라스미드] plasmid DNA분리의 원리

소개글

플라스미드 DNA분리에 대한 실험에 관한 것입니다.
내용설명과 실험과정이 잘 설명되어 있고 결과 및 고찰이 잘 쓰여져 있습니다..실험하시는 분들 많이 이용바랍니다.

목차

1. plasmid DNA분리의 원리
2. 실험준비물
3. 실험방법
4.결과
5.고찰

본문내용

2. 실험준비물
· Sol I(50mM glucose, 25mM Tris-Cl(pH 8.0), 10mM EDTA(pH 8.0)
· Sol II(0.2N NaOH, 1%SDS)
· Sol III(5M potassium acetate 60ml, glacial acetic acid 11.5ml, H2O 28.5ml)
· lysozyme, 70% EtOH, phenol, isopropanol, RNase A
· Microcentrifuge. vortexer. Pippette

3. 실험방법
1. 3ml LB에 키운 cell을 Microcentrifuge tube에 채운다음 max speed로 30초 centrifuge하여 cell을 harvest한다.
2. sol I + Lysozyme(5mg/ml)을 섞어서 ice에 두고 sol II는 사용하기전에 만들어서 상온에 둔다.
3. sol I을 150ug 넣고 vortex로 cell을 완전히 respend한 후 ice에 3분 둔다.
4. sol II를 300ug 넣고 gently inverted mix한다.
5. sol III를 225ul넣고 10초간 vortex하여 ice에 3분 둔다.
6. 12,000RPM 4℃ 10분 centrifuge하여 supernatant만 새 tube로 옮긴다.
7. supernatant가 든 tube에 phenol을 동일한 volume(650ul)으로 넣고 세게 1분간 vortex한다.
8. 12,000RPM 4℃10분 centrifuge하여 upper solution만 조심스럽게 새 tube에 옮긴다.
9. DNA solution의 0.7vol(350ul)으로 isopropanol을 넣고 inverted mix한다.
10. 12,000RPM 4℃ 20분 centrifuge한다.
11. pellet을 잃어버리지 않게 조심하여 supernatant를 버린다.
12. 70% EtOH를 1ml을 넣고 inverted mix로 섞는다.
13. max speed로 60초 centrifuge하여 supernatant만 조심스럽게 버린다.
14. 다시 spin하여 supernatant를 완전히 제거한다.
15. 상온에서 air-dry한다.
16. 100ul의 TE를 넣고 pellet을 resuspend한 후 RNase A 20ug/ml이 되도록 2ul 넣고 37℃ water bath에서 30분 반응시킨다.
17. 0.6% agarose gel에 1ul을 걸어 확인한다.

참고 자료

없음