[실험기법] 중합효소연쇄반응(PCR)-10장짜리

목차

중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction)
1. PCR의 원리

2. PCR의 실제
(1) 시발체(primer)의 선택
(2) PCR에 필요한 요소들
(3) PCR 반응 조건

3.PCR이 잘 안될 때의 점검사항 및 문제해결 방법
(1) PCR 산물이 없을 때
(2) 너무 많은 밴드가 보일 때
(3) primer-dimer가 많이 보일때
(4) 크기가 다른 밴드가 나올 때
(5) 어떤 DNA를 쓸때는 잘되고 다른 DNA를 쓰면 안되는 경우
(6) smear 현상이 나타나는 경우
(7) 오염(contamination)
(8) Long PCR

4. PCR의 응용
(1) PCR 산물의 subcloning:
(2) PCR 산물의 염기서열 분석
(3) 단일쇄 형태구조 다형성
(SSCP : Single Strand Conformation Polymorphism)
(4) RNA 대상의 유전자분석 (RT-PCR)
(5) 그 이외

5. DNA 젤 전기영동(Electrophoresis)
(1)젤의 종류
(2) 염색
(3) 전기영동 완충액

본문내용

중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction)
중합효소 연쇄반응법(PCR: Polymerase Chain Reaction)은 게놈 DNA에서 특정한 부분만을 시험관내에서 선택적으로 복제하고 증폭할 수 있는 간편하고 신속한 방법이다. PCR을 위해서는 증폭될 핵산과 증폭의 시발점이 되는 두개의 시발체(primer)가 있어야 한다. 여기에 추가적으로 적당한 dNTPs와 증폭에 적당한 조건 및 증폭을 시행할 수 있는 polymerase가 있어야 핵산의 증폭이 가능하게 된다. 그러나 성공적인 PCR이 되려면 적합한 시발체를 제작하는 일이 무엇보다도 중요하다. 최근 들어 PCR은 분자 생물학 실험에서 염기서열의 분석 등에 매우 활발히 이용되고 있는데 다양한 변형을 통하여 새로운 적용 가능성이 모색되고 있다.

1. PCR의 원리
PCR법의 기본원리는 다음과 같다.
첫단계는 이중쇄 DNA를 단일쇄 DNA로 열변성(denaturation)시킨다. 두 번째 단계는 올리고뉴클레오티드를 단일쇄 DNA에 결합(annealing)시키고 세 번째 단계는 결합한 올리고뉴클레오티드를 시발체로 하여 DNA polymerase에 의해 DNA를 합성(extension)하며 이상의 과정을 일정한 싸이클동안 반복한다.
이론적으로 매 PCR 주기마다 증폭되는 DNA는 2배씩 늘어나야 하나(

참고 자료

없음