[실험프로토콜] IHC (ImmunoHistoChemical Staining) - OTTIX
- 최초 등록일
- 2016.12.09
- 최종 저작일
- 2016.12
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소개글
OTTIX를 이용하여 탈파라핀한 후 IHC하는 방법입니다.
처음하는 IHC를 접한 분들도 쉽게 따라할 수 있도록 그림으로 설명하였습니다.
목차
1. Method
2. Next Day
3. Reference
본문내용
First day
1. 파라핀을 녹임.
- Dry oven 이용.
- Slide warmer 이용.
2. Deparaffinization (탈파라핀) : OTTIX plus 30min, 10min, 10min.
- 담궜다가 빼는 것을 10번 정도 반복한 후, buffer을 확실히 제거 후에 buffer을 바꿈.
3. Rehydration : OTTIX shaper 5min, 5min, 5min.
- 2번째 or 3번째 과정에서 미리 준비.
① 전기밥솥 전원 on.
② Keep warm start.
4. D.W로 5min washing.
- Slide를 rack에 꽂은 채로 물이 채워져 있는 물통에 수돗물로 조금씩 흘려서 washing.
5. Antigen Retrieval (in cooker)
① 전기밥솥에 물(수돗물) 250ml을 넣어줌.
② 1X Dako Target retrieval solution 50㎖을 전용 tube에 넣어줌.
- 10X Dako Target retrieval solution → 1X Dako Target retrieval solution
: 10X solution 5ml + D.W 45ml → 1X solution 50ml
③ Slide를 전용 tube 안에 넣고, 압력에 터지지 않게끔 뚜껑은 한 바퀴 정도 덜 닫음.
④ High pressure로 15min.
- 뚜껑 추는 압력이 걸리도록 동그란 모양이 있는 곳으로 방향을 두고, ice를 가지고 옴.
⑤ 추를 돌려서 압력을 뺀 후 용기 ice에서 cooling. (10-20min)
6. 1X PBS washing 5min.
- 10X PBS → 1X PBS
: 10X PBS 100ml + D.W 900ml → 1X PBS 1000ml
7. H2O solution.
① 조직 주변의 물기 제거.
② Dako pen 조직 각각에 테두리. (물기 제거하는 역할)
③ Dako Peroxidase Blocking solution를 조직크기에 따라 다르게 분주. (약 200ul)
④ RT 20min.
참고 자료
없음