생명과학실험 레포트5 Western blot
- 최초 등록일
- 2016.09.29
- 최종 저작일
- 2013.04
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목차
Ⅰ. 실험 일시
Ⅱ. 실험 목표
Ⅲ. 실험 목적
Ⅳ. 실험원리
Ⅴ. 실험 재료
Ⅵ. 실험 방법
Ⅶ. 실험 결과
Ⅷ. Discussion
Ⅸ. 참고문헌
본문내용
Ⅰ. 실험 일시
2013 / 4 / 12 (금) 3:30pm ~ 6:00pm ~ 2013 / 4 / 19 (금) 3:30pm ~ 6:00pm
Ⅱ. 실험 목표
항원에 대한 항체의 특이적 결합을 이용하여 단백질 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 분석하는 Western Blot 의 원리를 이해하고, 단백질의 SDS - PAGE 분리, SDS - PAGE gel 로부터 membrane 으로의 단백질 transfer, 항원 - 항체반응 및 항체에 부탁된 효소의 반응에 의한 발색반응 등의 실험 원리 및 실험 기법을 습득한다.
Ⅲ. 실험 목적
첫째, Western Blot 에 관련한 기본 원리들을 이해할 수 있다.
둘째, 단백질의 SDS - PAGE 분리, 단백질의 gel 로의 transfer, 항체에 의한 발색반응 실험 기법들을 익힌다.
셋째, 단백질 혼합물로부터 Targer Protein 인 AP 를 정성적으로 분석을 할 수 있다.
Ⅳ 실험원리
- Western Blot 의 원리
Western blot 은 항원 - 항체 반응을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이러한 western blot 방법은 전기영동으로 분리한 단백질의 검출을 쉽게 하기 때문에 각종 분석에 이용되고 있다. Western blot 방법은 크게 3 단계로 나누어 진행되는데, 첫 번째로는 단백질 혼합물에 대하여 SDS - PAGE 를 수행하여 단백질들을 크기에 따라 분리하는 단계이다. 이 단계에서는 protein 이 고유한 3차 구조를 잃고 linear 상태가 되어 오직 분자량에 의해서만 단백질들이 분리된다. 두 번째 단계는 SDS - PAGE gel 상에 분리된 단백질들을 nitro - cellulose 등의 membrane에 transfer 하는 단계이다. 이 과정에서 단백질로부터 SDS 가 제거되어 단백질의 3차 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. 세 번째로, 대상 단백질을 항원 - 항체 반응을 통해 검출해나는 단계이다.
참고 자료
생물학 실험서, 라이프 사이언스, 민철기, 강창수
단백질실험노트 (하), 월드사이언스, 김승호, 장규태
실험생화학, 월드사이언스, 김승호, 장규태
Wikipedia - Western Blot, SDS - PAGE