플라스미드 정제 원리 예비 및 결과 보고서

목차

1. 실험 제목
2. 실험 날짜
3. 공동 실험자
4. 실험 목적
5. 원리
6. 실험 방법
7. 결과
8. 고찰

본문내용

◆ 플라스미드 정제
플라스미드는 ori 원점, MCS, selctable marker를 가지고 있다. ori 원점은 genomic DNA와 독립적으로 복제하기 위한 시작점이고 MCS는 restriction enzyme site가 밀집된 부분으로 원하는 restriction enzyme으로 절단 후 유전자를 넣는 부분이다. 이러한 플라스미드를 competent cell에 넣는 것이 transformation이다. competent cell은 목적에 따라 XL1-blue나 Hit cell, BL-21(de3) 등을 선택해 사용 할 수 있다. XL1-blue는 유전자 복제 시 돌연변이를 일으키는 확률이 적어 DNA를 증폭해 많이 얻어 내는데 사용하고 Hit cell이나 BL-21(DE3)은 단백질을 얻어내는데 사용한다. 이렇게 플라스미드를 원하는 cell에 transformation한 후 이 플라스미드를 원래 cell이 가지고 있던 genomic DNA와 분리해내야 한다. Transformation된 cell은 플라스미드에 존재하는 항생제 내성 유전자로 항생제 배지에서 살아남아 플라스미드를 가지고 있는 cell을 선택할 수 있다. 이 cell을 액체 배지에서 배양 한 후 플라스미드를 회수한다. 세포를 끓이거나 알칼리로 처리하여 세포막을 용해하여 세포 내에 존재하는 플라스미드를 세포 밖으로 꺼낸다. 이 후 원심 분리하여 세포 잔여물을 제거하여 플라스미드를 얻어 낼 수 있다. 이렇게 얻어낸 플라스미드에 에탄올이나 아이소프로판올을 처리한 후 NaCl 같은 염을 가해주면 DNA가 침전된다. 침전된 DNA를 완충용액을 처리해 플라스미드를 분리 할 수 있다.

1) Growth of E.coli culture
- 형질 전환된 E.coli는 플라스미드를 포함하고 있기 때문에 항생제 저항성 유전자가 발현되어 항생제 배지에서 콜로니를 형성한다. 이 콜로니를 small scale로 액체 배지에서 배양한다.

참고 자료

없음