[생화학실험] β-Galactosidase purification & activity & SDS PAGE

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
1.1. 음이온교환 크로마토그래피를 이용하여 우리가 얻고자 하는 β-galactosidase를 분리해낸 후 ONPG와 반응시켜 효소의 활성을 확인하고 SDS-PAGE를 이용하여 정제된 β-galactosidase의 밴드 존재유무와 위치를 알아보는 것이었다.

2. 실험 이론 및 원리
2.1. 크로마토그래피(Chromatography)
크로마토그래피는 혼합물로부터 그 성분들을 순수하게 분리하거나 확인, 정량하는데 사용하는 편리한 방법 중의 하나이다. 이 방법에 의한 물질의 불리는 혼합물이 정지상(stationary Phase)이나 이동상(mobile phase)에 대한 친화성이 서로 다른 점을 이용하는 것으로, 이 친화성에 중요한 영향을 미치는 인자는 흡착, 이온화 및 분배계수들로써 여러 종류의 크로마토그래피는 이들 인자가 서로 합하여 작용하게 된다. 크로마토그래피의 분류 방법에는 여러 가지가 있지만, 일반적으로 이동상의 차이에 따른 분류를 대분류, 이동상과 고정상을 조합시킨 분류를 중분류, 이동상과 고정상을 조합시키고 분리의 상호 작용을 고려한 분류를 소분류라고 한다. 크로마토그래피는 이동상의 차이에 따라 두 가지 방법으로 크게 나눌 수 있다. 그 하나는 기체를 이동상으로 사용하는 가스 크로마토그래피(GC)이고, 다른 하나는 액체를 이동상으로 사용하는 액체 크로마토그래피(LC)이다. LC는 사용하는 고정상의 종류에 따라 칼럼 크로마토그래피(Column Cromatography), 박층 크로마토그래피(TLC), 페이퍼 크로마토그래피(Paper Partition Chromatography)등으로 나눌 수 있다. 중압액체 크로마토 그래피(FPLC)와 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)는 시료의 신속 분석을 목적으로 특별한 장치를 이용한 칼럼 크로마토그래피의 일종이다. 두 크로마토그래피는 단시간에 분리가 가능한 방법이다.

참고 자료

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