[생명과학실험]Alkaline phosphatase의 정제

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 토의 사항
6. 참고 문헌

본문내용

Chromatography는 적절하게 정지상과 이동상을 사용하여 섞여있는 혼합물을 이동속도 차이에 의해 분리해내는 방법이다. 이 방법에는 여러 종류가 있는데 먼저 column chromatography가 있다. Column chromatography는 관 속에 정지상으로 쓰일 물질을 채우고 그 위에 이동상을 넣어주면 정지상 사이로 이동상이 내려가면서 속도차이가 나게 되어 혼합물이 분리되는 원리를 이용한 것이다. 그 다음으로 paper chromatography가 있다. 이것은 주로 색소를 분리할 때 쓰는데 색소마다 물을 따라 올라가는 속도가 달라 분리가 된다. 그리고 gel permeation chromatography가 있다. 이 gel permeation chromatography는 gel을 운반체로 사용하여 분자량에 따라 혼합물을 분리한다.

<중 략>

1.1.1. 각 fraction을 받을 10개의 e-tube(microtube)를 준비한다. 각 튜브에 이름을 쓰고 500㎕ 지점에 표시를 한다.
→ PM(positive mark), FT(flow through), 50mM NaCl-①, 50mM NaCl-②, 100mM NaCl-①, 100mM NaCl-②, 150mM NaCl-①, 150mM NaCl-②, 200mM NaCl-①, 200mM NaCl-② 총 10개의 이름을 쓴다.
1.1.2. AP가 당연히 있을 것으로 예상되는 positive control 로써 원액 enzyme solution을 덜어 PM이라고 쓴 튜브에 넣고 ice에 보관한다.

<중 략>

본 실험에서는 DEAE ion exchange column를 이용하여 Column Chromatography를 수행하여 PM 속에서 AP를 정제해내는 실험을 하였다. 이때 우리가 얻고자 하는 AP는 E.coli가 번식력이 뛰어 나기 때문에 E.coli를 배지에 번식시켜서 얻은 것을 사용 하였다. 그 방법은 AP는 주로 outer membrane과 inner membrane사이에 위치하기 때문에 outer membrane을 삼투압을 통해 부순 뒤, 밤새 단백질의 base pair에 따라 분리해내는 것이다.

참고 자료

Chemistry, Steven S. Zumdahl, Brooks, 2009.01.17., p.28
Natural products isolation. 2nd ed, Latif, Zahid, Humana Press, 2005, p.62-63