[분자유전학] Blue&White selection

목차

I. Introduction
II. Material
III. Method
IV. Result
V. Discussion

본문내용

I. Introduction
항생제 저항 유전자의 삽입 비활성화가 재조합 확인의 편리한 방법을 제공하지만, 몇몇 중요한 플라스미드 클로닝 벡터는 다른 방법을 이용한다. 그 한 예가 pUC8이며 ampicillin저항 유전자와 lacZ’ 유전자를 지니며 lacZ’는 효소 β-galactosidase에 해당하는 일부 유전자이다. pUC8로 클로닝하는 것은 lacZ’ 유전자의 삽입 비활성화로 β-galactosidase를 합성할 수 없는 것으로 재조합체임을 확인한다.
β-galactosidase는 lactose를 glucose와 galactose로 분해하는데 관여하는 일련의 효소 중 하나다. 이것은 일반적으로 E.coli(대장균) 염색체에 있는 유전자 lacZ에 해당한다. 어떤 균주의 E.coli는 변형된 lacZ’ 유전자를 가지고 있으며 이것은 lacZ’라 부르는 β-galactosidase의 α-peptide 부위에 해당되는 유전자 조각이 없다.

<중략>

Methods
IPTG 100μl, X-gal 20 μl를 LBA에 깔아준다.
Transformed cells를 200 μl씩 plate에 spreading한다.
Plate가 적당히 마르면 뒤집어서 37℃에서 overnight동안 incubation한다.

참고 자료

Lizabeth A. Allison, 분자생물학 입문서, 월드사이언스, 2009,
T.A Brown, 유전자 클로닝 입문, 탐구당, 2004,
진익렬, 게놈미생물학, 월드사이언스, 2005,