[분자유전학] DNA Ligation (라이게이션,리게이션)

목차

I. Introduction
II. Material
III. Method
IV. Result
V. Discussion

본문내용

I. Introduction
제한효소(restriction enzyme)란 DNA분자의 특정염기서열을 인지하여 이중가닥 DNA를 절단하는 균주 특이성을 갖는 핵산내부가수분해효소이다. 이것의 원래 기능은 세포내로 침입해오는 바이러스나 외래 DNA를 절단하거나 제거하는 박테리아의 자기방어 기구이며, 자신의 DNA는 메틸화시켜 외부의 DNA와 구분하여 보호한다. 제한효소는 크게 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ 군으로 분류되며 우리가 흔히 쓰고 있는 것들이 회문구조를 가진 4-6개의 짧은 염기쌍을 인식하는 Ⅱ군에 속하는 효소이다.
이제까지 2,500 이상의 제한효소가 분리되었고 인지 연기순서의 종류는 200가지가 넘는다. 이들은 어떠한 지점을 중심으로 대칭적으로 염기서열 내에서 절단작용을 갖는데, 서로 반대방향으로 진행되는 동일한 염기순서가 양쪽 가닥에서 발견되기 때문에 효소들은 거의 이중나선의 절단을 만든다.
Ⅰ형 효소는 특이적으로 식별하는 염기서열, 즉 수식활성에 의해 절단되는 부위가 다르며, 절단점이 일정하지 않은 특징을 가지고 있다. 이 때문에 특이적인 DNA 단편을 얻기에는 적합하지 못하다.

<중 략>

Methods
Tube의 아래에 contents를 모으기 위해 PCR DNA tubes/RBC T&A Cloning vector를 원심분리 한다.
사용하기 전에 힘차게 ligation buffer를 vortex한다.
Sample을 준비한다.
ComponentUser Sample(μl)Positive Control
10X Ligation Buffer A11
10X Ligation Buffer B11
T&A cloning vector22
PCR product3-
control insert DNA-1
T4 DNA Ligase11
D.WTo 10To 10
Pipetting으로 잘 섞는다.
22℃에서 15분 동안 incubation한다. 그리고 만약 transformant의 최대한 요구된다면 4℃에서 overnight동안 둔다.

참고 자료

미정영치, 신분자유전학, 신일상사, 2001,
Watson, 유전자의 분자생물학, 탐구당, 1991,
Ozeki, 분자생물학 이해, 고려의학, 1999,
http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=266719
http://www.yeastern.com/Products.php?pkid=8&pttype=51 (그림)