Genomic DNA 추출 및 PCR

목차

1. Experiment
2. Experiment Method
3. Attention
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Experiment
실험에 앞서 50X TAE Buffer와 Agarose powdar, PCR solution: SapphireAmp Fast Pcr Master Mix(+primer)를 준비하고 GeneJET Genomic DNA purification kit를 준비한다. DNA ladder와 6X Sample loading buffer, 면봉(or 대장균)이 역시 필요하다. 실험에 직접 제조해서 쓰는 용액으로 1X TAE Buffer 1L와 0.5~2% Agarose gel, 50% 에탄올을 제조한다.

2. Experiment Method
첫 번째로 Agarose gel 제조를 한다. 1X TAE 완충용액에 Agarose가 5~15%가 되게 powder을 유리병에 넣어준다. 이때 최소부피는 100ml 기준으로 한다. 그 다음 전자레인지를 이용하여 1분 간격으로 powder가 완전히 용해 될 때까지 돌려준다. 이때 주의 사항으로는 유리병 뚜껑을 열고 꼭 1분 간격으로 거품이 안 생기게 해서 돌려야 한다. power가 완전 용해되고 대략 10~20분 후 손으로 만졌을 때 약간 뜨겁다는 느꼈을 때 RedSage(20000X)을 넣어준다.

그 후 gel plate 부은 담은 comb을 꽂아서 굳을 때까지 기다린다. 굳은 후 sample들을 6X sample loading buffer와 잘 섞은 다음 홈에 넣어준다. gel이 잠길 정도로 1X TAE Buffer을 전기영동 장치에 채우고, 전기영동을 실행한다.

Agarose gel은 전기영동에 쓰이는 것으로 DNA가 이동하는 매질의 역할을 한다. DNA를 고정하는 능력이 우수하며 DNA를 분자량에 따라 분리해내기가 용이하다.

두 번째로, Genomic DNA추출을 하기 위해 면봉을 이용하여 구강에서 남녀 DNA를 채취한다. 조심스럽게 솜 부분만 microtube에 넣어준다. sample이 들어간 microtube에 solution A 200uL을 넣어주고 vortexing을 해준다.

참고 자료

T.Y. Wang, L. Wang, J.H. Zhang and W.H. Dong, “A simplified universal genomic DNA extraction protocol suitable for PCR” (2011).
Ahmed I, Islam M, Arshad W, Mannan A, et al. (2009). High-quality plant DNA extraction for PCR: an easy approach. J. Appl. Genet. 50: 105-107.