Protein Purification
- 최초 등록일
- 2015.08.01
- 최종 저작일
- 2014.10
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목차
1. Introduction
2. Theoretical Background
3. Chemicals
4. Procedure
5. Results & Discussion
6. Conclusion
7. Reference
본문내용
1. Introduction
GFP 단백질을 정제해본다.
2. Theoretical Background
1) Protein purification
일반적으로 protein purification 과정은 위와 같은 과정을 거쳐서 진행된다. 원하는 단백질이 어떤 형태로 발현되는지, 물에는 녹는지, 어떤 물질과 친화성이 높은지 등을 고려하여 그 특성을 이용해서 purification 시킨다.
2) 6xHis Affinity Chromatography
위의 과정대로 purification을 진행하면 되지만, 대부분의 DNA 재조합 과정에서 나온 단백질은 특정한 affinity tag를 가진다. 따라서 affinity chromatography로 쉽게 분리할 수 있다.
6xHis affinity tag는 Nickel-Nitrilotriacetic acid에 붙어서 작용한다. 이것은 단백질의 C 말단 혹은 N 말단에 작용할 수 있는데, 면역성이 약하고 pH 8.0에서 tag이 작고 큰 변화를 일으키지 않아서 tag이 단백질에 붙어도 단백질이 구분될 만큼 변하지 않는다.
참고 자료
KAIST laboratory manual
Biochemistry, 7th edition, Stryer