[식품분석실험] Biuret assay 와 Bradford assay를 이용한 단백질 정량

목차

Ⅰ. 실험 목적 및 원리
Ⅱ. 실험 재료 및 방법
Ⅲ. 실험결과
Ⅳ. 고찰

본문내용

Ⅰ. 실험 목적 및 원리

식품 중 단백질은 탄수, 수소, 산소, 의 원소 외에 일정량의 비율로 질소를 약 16% 함유하고 있다. 질소는 지방이나 탄수화물 등 다른 주요 성분에는 포함되어 있지 않아서, 단백질 정량은 전질소량을 정량한 후 일정의 계수 6.25를 곱하여 단백질 함량으로 간주한다.
단백질을 구성하고 있는 특수한 아미노산의 잔기나 카복실기 또는 아민기와 여러 종류의 시약이 반응하여 고유의 Chromophore를 만든다. 이들의 최대 흡수파장에서 흡광도를 측정하여 단백질의 농도를 산출한다.
Biuret assay는 단백질 용액과 두 개 이상의 카바밀기(-CONH)를 가진 뷰렛과의 반응한다.
시약이 단백질과 만나면 보라색으로 색이 변하는 성질을 이용하여 단백질 검출에 사용한다. 뷰렛반응 시약은 펩티드결합이 두 개 이상 존재하는 뷰렛 구조이며, 2가의 구리이온(Cu2+)이 들어 있어 푸른색을 띤다. 이 뷰렛구조가 2가의 구리 이온과 반응하여 540nm에서 검출되는 보라색 착화합물을 형성한다.
Bradford assay는 염색약인 Coomassie Brillant blue G250이 단백질과 결합하여 푸른색으로 변하고 최대흡수파장이 595nm로 옮겨지는 것을 이용하여 단백질의 농도를 정량하는 방법이다. 흡광도를 측정하여 기준 물질인 BSA를 기준으로 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 알 수 있다.

Ⅱ. 실험 재료 및 방법

1) Biuret assay
- 실험재료
플라스틱 큐벳, 피펫, vortex mixer, falcon tube, 증류수, 미지시료 3종, Biuret 시약, Bovine Serum Albumin(BSA)
• Biuret 시약
① CuSo⋅5HO 1.5g, potassium sodium tartrate 6.0g, potassium iodide 1g 을 500ml 증류수에 녹였다.
② 10% NaOH 300ml를 가한 후 증류수를 가하여 1L로 정용하고 햇빛이 차단되는 플라스틱 시약병에 넣고 보존하였다.

참고 자료

식품분석학 (수학사)