Plasmid preparation, Electroporation and Protein purification.

소개글

E. coli로부터 Plasmid DNA를 추출하고, 이를 electroporation 방법을 통해 competent cell에 도입시킨다. 이와 같이 transformation 된 E. coli를 충분히 증식 시킨 후에, 이로부터 원하는 protein만을 선별적으로 골라내기 위하여 His tagging 방법으로 protein을 정제하는 과정을 진행하는 과정에 대해 리포트 한 글이다.

목차

1. Objective
2. Materials & Methods
3. Result
4. Discussion

본문내용

Objective
E. coli로부터 Plasmid DNA를 추출하고, 이를 electroporation 방법을 통해 competent cell에 도입시킨다. 이와 같이 transformation 된 E. coli를 충분히 증식 시킨 후에, 이로부터 원하는 protein만을 선별적으로 골라내기 위하여 His tagging 방법으로 protein을 정제하는 과정을 진행한다.


Materials & Method
a) Plasmid preparation & Electroporation
(1) Materials: SolutionⅠ,Ⅱ,Ⅲ/ Wash buffer/ Elution buffer/ Cells for plasmid extraction/ Competent cells/ Centrifuge/ Vortex/ Electroporator/ LB-yeast extract/ Agar

(2) Method
Plasmid extraction 과정을 진행하였다. 먼저 E. coli pellet 샘플을 원심분리 하였다. 상층액을 따라 버린 샘플에 SolutionⅠ를 첨가하였다. Vortex를 사용하여 잘 섞어준 후에, 곧이어 SolutionⅡ을 첨가하였다. 손으로 섞어 준 후에 SolutionⅢ을 첨가하여 주면, plasmid DNA외에 본래 chromosome은 서로 엉키게 되고 남은 깨끗한 상층액을 뽑았다. 다음으로 wash solution을 사용하여 불순물을 제거하는 과정을 2번 반복하였고, 최종적으로 elution buffer를 첨가하여 Plasmid DNA를 추출하였다.

참고 자료

Bradford assay, http://blog.naver.com/2na0124?Redirect=Log&logNo=90152474715.
H, T, Robert. (2005). 유전학의 이해. 전상학 역. 라이프사이언스. p.320.
박상대. (1998). 분자세포생물학. 아카데미서적. p.16.