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[생화학실험]재조합 플라스미드 DNA의 분리 및 lac Z 유전자의 확인,단백질 연구를 위한 조추출액 제조

*효*
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최초 등록일
2014.07.12
최종 저작일
2014.03
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목차

1. 실험 날짜
2. 실험 제목 및 목적
3. 개요 – 이론 및 실험 원리
4. 실험재료 및 방법
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

2. Crude extract
1) 세포 파쇄 : 완충 용액에 세포를 풀어 파쇄. ⓐ 균질화(homogenization) : 부드러운 동식물 조직을 파쇄. 믹서나 막자를 이용해 갈아준다. ⓑ 음파 파쇄(sonication) : 기계적 진동을 일으켜 조직 파괴 ⓒ French pressure cell : 엄청난 압력을 가했다가 순간적으로 풀어 세포가 터지도록 한다. ⓓ Glass bead vortexing : 구슬과 세포를 섞어 흔들어 파괴되도록 ⓔ 효소 분해 : 세균의 경우에, lysozyme을 처리 ⓕ 화학 물질 : 계면 활성제, 유기 용매 처리 ⓖ 삼투압 : 적혈구 ⓗ 냉동-해동freeze-thawing : 얼음 결정으로 세포 파괴 2) 얻기 : 원심분리해 상층액을 얻는다. (잔해debris에는 단백질 등)

3. Sonication
10~20kHz의 음파를 사용하여 유리기구 등의 세정이나 세포나 세포내 구조체 등을 파괴하는 방법. 진동수가 약 20kHz 이하의 가청주파영역을 초과하는 음파를 초음파라고 하는 경우가 있으므로 초음파 처리와 같은 의미로 사용하기도 한다. 세포 파괴에 있어서는 음파와 초음파를 구분하여 고려할 필요는 없다. 공동현상으로 생성되는 거품진동에 의해 생기는 소용돌이 유동을 세포 파괴의 원인이라고 생각할 수 있다. 음파 처리장치로는 막대모양 진동자를 시료에 담그는유형과, 진동자를 설치한 욕조 같은 용기에 시료를 넣어 처리하는 유형이 있다.

참고 자료

http://jnlovejy.blog.me/90130813459
http://www.pms.co.kr/pms/board_pic/special_data/4_uem.pdf
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=420448&cid=580&categoryId=580
http://en.wikipedia.org/wiki/Sonication


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