Western Blotting 정의, 목적 및 실험방법 (Western Blotting, 단백질 정제,SDS-PAGE,SDS,단백질 추출,Protein Extraction )

소개글

Western Blotting 정의, 목적 및 실험방법에 대해 정리한 자료입니다.

목차

I. Western Blotting의 정의 및 목적

II. 단백질 정제 목적

III. Western Blot Workflow 및 원리
1. Protein Extraction (단백질 추출 및 분획)
2. Protein Assay (단백질 정량)
3. SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)
4. Transfer
5. Blocking
6. Abs Detection
7. Detection
8. Stripping

본문내용

1. Protein Detection
- 단백질을 크기별로 분리하는 기술로, 항원-항체반응을 이용하여 전체 단백질에서 특정단백질만을 검출하는 방법이다.
- 전기적으로 분리된 단백질을 membrane으로 transfer하여 확인하는 방법으로 주로 단백질이 갖고 있는 antigenic epitope와 특이하게 반응하는 항체를 이용한다.
- 방사선동위원소로 표지되지(radiolabelled) 않은 복잡한 형태의 단백질 중에 특이한 단백질을 확인하고 정량하는데 유용하다.
- 단백질의 성질, 아미노산 조성, 아미노산 서열이 결정하기 위한 순도 높은 시료 확보가 주목적이다.

□ 단백질 정제 목적
단백질의 정제 목적은 1) 생리활성의 해석, 2) 고차구조의 해석, 3) 단백질 분자종의 동정(부분 아미노산 서열 분석), 4) 항체 제작을 위한 항원의 정제 등 여러 가지가 있으며 목적에 따라 정제 방법이 크게 다르게 진행된다. 이때 정제한 단백질의 양과 정제 단백질의 변성상태의 유무는 주의깊게 점검하여야 하며 재조합 단백질을 정제하는 경우와 미지의 단백질을 정제하는 경우는 정제 방법과 난이도가 전부 다르다. 정제에 큰 영향을 미치는 요인으로서는 시료의 선정, 목적 단백질의 검출법, 단백질의안정성, 단백질의 추출법 등이 있으며, 이에 대해서도 사전에 충분한 검토가 필요하다.

참고 자료

없음