실험3. Polymerase Chain Reaction(PCR)을 이용하여 pMFGtk으로부터 tk gene의 대량생산

목차

가) 실험 이론과 원칙
나) 실험 재료와 방법
다) 실험 결과
라) 고찰과 결론
마) 참고 문헌

본문내용

가) 실험 이론과 원칙
① 실험 목적
PCR하는 방법을 알고 전기영동 결과를 통해 TK coding sequence의 size를 확인한다.
②Polymerase Chain Reaction(PCR)
중합효소 연쇄반응은 이미 알려진 특정 DNA 부위를 두 개의 시발체(primer)를 이용하여 특이적으로 반복 합성하여 시험관 내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 미량의 DNA를 10 ^{ 6}배의 다량의 DNA를 얻을 수 있는 중요한 분자생물학적 기법이다. 이러한 과정에는 DNA 중합효소가 관여함으로써 가능하다. 즉, genomic DNA 와 같은 거대한 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel 이나 폴리아크릴 아마이드 젤 상에서 뚜렷하게 보이는 띠로 가시화 할 수 있다. 이와 같이 증폭된 DNA를 여러 의학적인 연구에 적용할 수 있으며, HLA형의 결정, 법의학 분야에서 특정인의 유전자 검출, 암 유전자의 검출, 유전성 질병의 진단 그리고 감염성 질환의 진단 등에 이용되고 있다.

<중 략>

gel에 홈을 만들어 DNA나 RNA, 단백질 등의 분자를 집어넣고 전류를 흘려주면 음전하를 띤 이들 분자들은 전기적인 힘에 의해 gell 안에서 이동하게 된다. 같은 크기를 가진 분자들은 하나의 집단을 형성하여 움직이게 되는데 만약 수조개의 동일한 분자들을 전기영동 하였다면 gel을 염색하였을 때 이것이 하나의 띠 모양으로 나타나는 것을 확인할 수 있다. 전기영동할 때 DNA가 agarose gel 속을 이동하는 속도는 크기(분자량)와 입체구조에 따라 다르다. 이 성질을 이용하여 DNA의 형태 해석이나 분자량을 측정할 수가 있다. agarose gell 전기영동은 gell의 농도에 따라 DNA 절편을 효과적으로 분리할 수 있는 범위가 다르며, 주로 0.5~25kb의 크기를 가진 DNA 절편을 분리하는데 쓰인다.

참고 자료

이종원, 생화학 실험 교재, 대구 가톨릭 대학교 의과대학, 29쪽-36쪽
Pamela C. Champe, 리핀코트의 그림으로 보는 생화학, 제 4판, 도서출판 신일북스 2009년, 479쪽-483쪽
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1261192&cid=200000000&categoryId=200000864