ELISA

목차

Ι. Introduction
Ⅱ. Materials
Ⅲ. Methods
Ⅳ. Result
Ⅴ. Discussion.
Ⅵ. References

본문내용

본 실습의 목적은 Antigen-Antibody reaction을 이용한 assay 방법인 ELISA를 이용하여 antigen의 양을 측정하고, 미지시료의 titer를 분석해보는 것이다. ELISA는 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay의 약자이며 Enzyme assay(EIA)로 불리기도 한다.

실험에 사용된 방법들을 살펴보면
가) ELISA: 항원(또는 항체)에 알칼리성 phosphatase 또는 peroxydase등의 산소를 결합시켜 두고 그 산소활성을 지표로 삼아 항원항체반응의 정도를 안 다음 여기에서 항원(또는 항체)의 양을 구하는 것이다. 이 방법의 이점으로서 고감도, 조작의 간단함 및 Radioimmunoassay처럼 방사성물질을 사용하지 않아도 된다는 점을 들 수 있다. 호르몬이나 면역글로불린의 정량법으로서 응용이 되고 있으며, 측정용 키트도 시판되고 있다.
Conjugate Antibody가 색깔을 내는 원리는 Substrate인 OPD를 Antibody에 conjugation된 enzyme인 HRP(Horseradish peroxidase)가 oxidation시키기 때문이다. HRP는 Hydrogen donor로부터 로 hydrogen을 transfer한다. 바람직한 substrate는 평상시에는 무색투명하고 효소 반응에 의해 색을 나타내는 성질을 가져야 한다는 조건을 갖는다. OPD는 Orthophenyenediamine의 약자로, 이러한 조건을 완벽히 충족시키는 substrate이다. OPD는 Oxidized form으로 변하면서 445nm 또는 490nm 파장의 빛을 띠게 된다.
OD값을 측정함으로써 실험자는 시료의 양을 추정할 수 있다.

참고 자료

Abul K. Abbas, Cellular and Molecular Immunology 7/ed., 2011, Elsevier.