SDS-PAGE, Western blot

*미*

최초 등록일: 2013.11.13
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1. 단백질을 분리하고 SDS-PAGE를 통해 단백질을 확인한다.

? Materials
디스크, grinder, KGGMMV virus에 감염된 오이잎, pipette, 비커, ice, buffer, PCI, 원심분리기, 에탄올, UREA / 증류수, 1.5M Tris(6.8, 8.8), 40% acrylamide mix, 10% SDS, 10% APS, TEMED

? Methods
① 0.1g의 오이잎을 디스크에 준비하고 적당히 간다.
② 250㎕의 buffer를 넣고 잎을 곱게 간다.
③ 동량의 PCI를 넣고 vortexing한다.
④ 4℃에서 15분간 원심분리한다.
⑤ 상층액과 하부의 엽록체를 제거하여 단백질만 남긴다.
⑥ 1ml의 아세톤을 넣고 섞는다.
⑦ 4℃에서 3분간 원심분리한다.
⑧ 5-7번 과정을 두 번 더 반복한다.
⑨ 샘플을 건조시킨다.
⑩ 200㎕의 UREA를 넣고 얼음 위에 둔다.

참고 자료

http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php Board=expqnaFindText=phenol/chloroformid=120589ksr=1
http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php Board=expqnaid=210867
http://en.wikipedia.org/wiki/Westernblot
http://en.wikipedia.org/wiki/SodiumDodecylSulfate
http://en.wikipedia.org/wiki/Luminol
http://nanumlog.tistory.com/129
http://biotechnology.tistory.com/34
http://cpl.yonsei.ac.kr/sero/serotext/3.htm
http://home.inje.ac.kr/~lecture/immunology/immch4antibody/immch4antibody.htm
http://www.genehunters.co.kr/Training/033.htm#01
http://www.genehunters.co.kr/Training/04.htm
http://www.genehunters.co.kr/Training/09.htm#
http://chanjae.net/26
http://www.biorad.com/evportal/en/KR/evolutionPortal.portal nfpb=truepageLabel=SolutionsLandingPagecatID=LUSPQXC4S
http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/WoodC/western.html

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