Purification&DNA전기영동 예비

목차

1. 실험 목적

2. 실험 원리
Ⅰ. 인지질(phospholipids)
Ⅱ. PC (phosphatidyl choline : Lecithin)
Ⅲ. Hydrolysis (가수분해)
Ⅳ. PL (Phospholipase, 인산지방질 가수분해 효소)
Ⅴ. PLD (Phospholipase D)
Ⅵ. PLD를 이용한 PC의 가수분해
Ⅶ. Buffer solution (완충용액)
Ⅷ. 생성물의 확인

3. 실험 기구 및 시약

4. 실험 방법

본문내용

1. 실험 목적
인지질 가수분해 효소인 PLD를 이용하여 PC를 가수분해 시켜 생성물인 PA(Phosphatidic Acid)를 TLC로 확인한다.
2. 실험 원리
Ⅰ. 인지질(phospholipids)
1) 세포막(막지방질)의 주요성분으로 지방분자와 같은 구조이지만 글리세롤의 두 탄소 원자와 두 개의 지방산이 각각 결합하고 글리세롤의 세 번째 탄소 원자에 인산이 붙음. 그리고 다시 이 인산에 극성분자(ex) choline, serine 등)가 붙어 있다. 따라서 인지질은 인산기 및 인산기와 결합한 극성물질로 인해 친수성을 띠는 머리부위와, 두 탄화수소 사슬로 인해 소수성을 나타내는 꼬리 부위로 이뤄져 있다. 따라서 양친매성 분자이다.
2) 지방질 이중층
생체막은 인지질 이중층(phospolipid bilayer)으로 되어 있다. 이는 화학적 특성상 친수성인 머리 부분과 소수성인 꼬리부분으로 구분되는 인지질 분자가 두 층으로 나란히 배열되어있는 구조이다. 따라서 꼬리부분은 물에서 멀리 떨어지려하는 반면 머리 부분은 물과 가까이 하려고 한다.

<중 략>

★ A. Buffer Solution의 제조
1. 0.28 mL CH3COOH에 0.55 g CaCl2를 혼합한다.
2. 증류수(사용량 50 mL 중에서 소량)를 조금 넣고 0.55 g CaCl2 조각을 완전히 녹인다.
3. pH meter를 이용하여 1M NaOH로 pH 5.6을 만든다.
4. 증류수를 첨가하여 50 mL를 만든다.

★ B. PC의 가수분해
1. PLD(소량만 사용)가 들어있는 50 mL Conical tube에 buffer solution을 섞는다.
2. 250 mL 2구 둥근플라스크에 PC를 ethylether 50 mL 중에서 소량의 ethylether을 첨가하여 녹이고 완전히 다 녹으면 나머지 ethylether를 첨가한다.
(→ ehylehter의 냄새가 자극적이므로 반드시 암후드 안에서 실험)

참고 자료

없음