의생물학REPRORT4 - Cell division 관찰

목차

1. 실험제목
2. 실험내용
3. 실험재료
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 실험고찰
7. 참고문헌

본문내용

실험 제목
Cell division 관찰

실험 내용
콩나물의 생장점과 머리카락의 모낭세포를 관찰하고 DNA(chromosome) 분열을 관찰한다. 메탄올처리를 하면 지방이 제거되어 세포가 유리와 친화력을 가지게 된다. Heat fixation은 유리를 이루는 Si와 -OH기가 더 강하게 달라붙게 하는 역할을 한다. pH6.8로 세척하는 이유는 이 pH에서는 트립신이 비활성화 되고 염색이 가장 잘되기 때문이다. Giemsa 염색법은 독일의 세균학자인 Gustav Giemsa가 개발한 염색법으로 A-T가 많은 곳이 부분 특이적으로 염색되는 G-Banding pattern이 나타난다. 이렇게 염색된 세포를 현미경으로 관찰하여 세포분열을 관찰한다. 현미경으로 세포를 관찰할 때에는 저배율로 세포의 위치를 찾은 다음 고배율로 보아야 한다. 고배율일 때는 공기와 렌즈와의 굴절률차이로 초점이 잘 맞지 않으니 렌즈와 굴절률이 비슷한 oil을 떨어뜨려 초점을 맞춘 후 관찰한다.

실험 재료
콩나물, 머리카락, 프레파라트, 메탄올, 알코올램프, 트립신, pH 6.8 완충액, 김자 염색약, 수돗물, 현미경

실험 방법
① 식물 뿌리의 생장점을 얻기 위해서 온전한 콩나물뿌리에서 밑의 2~3mm를 잘라낸다.
② stem cell을 얻기 위해서 머리카락을 뽑아 뿌리 부분의 모낭세포를 준비한다.
③ 두 개의 프레파라트 사이에 세포를 놓고 손으로 눌러 세포끼리 겹치지 않도록 한다.
④ 세포의 지방을 제거하여 유리와 세포가 친화력을 가질 수 있도록 세포에 메탄올을 떨어뜨리고 흘려보낸다.
⑤ 알코올램프에 불을 붙이고 불의 윗부분에 프레파라트를 수평으로 여러 차례 왔다갔다 이동시키면서 Heat fixation한다.
⑥ 단백질, 특히 chromosome의 히스톤 단백질을 제거하기 위해 트립신(pH 8)처리를 한다.
⑦ pH 8에서 활성화 되는 트립신을 비활성화 시키고 염색이 잘 되도록 pH 6.8의 완충액으로 세척한다.
⑧ Giemsa 염색약으로 염색한다. (이때, 2분을 넘기지 않도록 주의한다.)
⑨ 수돗물로 염색약을 씻어낸다.

참고 자료

http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=431346&mobile&categoryId=1323