western blotting 기법을 이용한 단백질의 크기별 분리 및 원하는 단백질의 detection

목차

Ⅰ. 도입부
1. Life science Workflow
2. Western Blotting의 정의 및 목적

Ⅱ. 실험방법 및 원리
1. Western Blotting (HRP 2차 항체를 사용하는 경우)
2. 실험과정

본문내용

Ⅰ. 도입부

1. Life science Workflow

2. Western Blotting의 정의 및 목적
Protein을 size 별로 분리하는 기술, 항원-항체 반응을 이용하여 전체 단백질에서 특정 단백질 만을 Detection 할 수 있다. 특정 단백질의 유무 확인이 가능함
sample(total protein)을 SDS-PAGE를 이용해 분리하고, 이 단백질을 membrane에 transfer과정을 거쳐 1차 항체를 처리하고 그 항체에 결합하는 2차 항체를 처리하여 기질을 처리하여 발광을 유도하여 특정 protein의 유무를 검출 한다.
protein size별 분리 (SDS)
Ag-Ab reation
Detection (HRP-Luminol, ECL)

<중 략>

-Fc (crystalizable fragment) : 항원과 결합하지 못하는 조각
Monoclonal antibody & Polyclonal antibody
Primary Antibody selection guide
예)Anti-Tubulin, beta III isoform, C-terminus, clone TU-20 (Similar to TUJ1)
Pierce antibody Cat# : MAB1637
-Species Reactivity : 이 antibody가 인식할 수 있는 antigen site가 있는 종(Species)
-Application : 본사에서 test 된 이 antobody를 이용할 수 있는 실험.
-Host : antibody를 어디서 만들었는가. Antibody가 생산된 동물.
-Antibody Type : monoclonal 인지 polyclonal 인지를 나타냄.
Secondary Antibody
-Primary로 사용한 antibody의 Host에 따라 2nd 를 선택한다.
-다양한 Conjugation Antibody : 내가 보고자 하는 결과물을 형광, 발색, 침전물 등 현상을 이용하여 편리하고, 빠르게 보기 위하여 선택.

참고 자료

없음