[생물학 실험보고서] 수용성세포 (Competent cell) 준비실험

소개글

차가운 CaCl2 처리를 통해 박테리아 세포가 외부 DNA를 잘 받아 들일 수 있는 competent 한 상태를 유도하는 실험입니다.

목차

1. Abstract

2. Introduction

3. Materials and Methods

4. Results

5. Discussion

6. References

본문내용

Abstract
이번 실험은 차가운 CaCl2 처리를 통해 박테리아 세포가 외부 DNA를 잘 받아 들일 수 있는 competent 한 상태를 유도하는 것이다. 첫 번째 실험에서 사용했던 DH5α를 O.D. 600값이 0.5정도가 될 때까지 배양하여 사용하였으며 대부분의 과정을 차갑고 신속하게 진행하였다. 실험결과 transformation efficiency는 3.7 x 105 cell/DNA μg이 나왔다.
Introduction
Competent cell
박테리아가 그 생장과정 중에 자연적으로 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 상태를 competence 라고 하는데 이는 크게 자연적 환경에서 일어나는 natural competence와 실험실 환경상에서 인위적으로 일어나게 하는 induced or artificial competence로 나눌 수 있다.

<중 략>

Competent cell의 원리
기본적으로 E.coli cell이 DNA를 흡수할 수 있는 상태가 되기 위해서는 DNA가 세포막 주위에 존재 해야 한다. 하지만 DNA는 phosphate에 의해서 (-)charge를 띠게 되고, 세포막 역시 diacylglycerol이 (-)charge를 띠기 때문에 서로 repulsion이 발생 하게 된다. 따라서 이를 줄여주기 위하여 multiple cation (e.g. Ca2+, Rb2+ )등을 넣어준다. 이렇게 양이온이 들어가게 되면 세포막 고유의 charge가 변하면서 막 구조가 불안정하게 되면서 DNA를 받아들일 수 있는 흐물흐물한 상태가 되는 것이다.

참고 자료

Sambrook J. and D. W. Russell, Molecular Cloning: A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, U.S.A, pp1.105~1.122
John M. Martinko, Brock Biology of Microorganisms, 11th ed., Pearson Education International, p270
http://bitesizebio.com/2007/09/18/ecoli-electroporation-vs-chemical-transformation
http://genehunters.co.kr/main.php
http://www.sigmaaldrich.com/Local/SA_Splash.html