[생물학 실험보고서] PCR을 이용한 Virus 진단

소개글

PCR을 이용하여 Norovirus의 감염 및 관련된 질병의 진단을 확인해보는 실험입니다.

목차

1. Abstract

2. Introduction

3. Materials and Methods

4. Result

5. Discussion

6. References

본문내용

Abstract
이번 실험은 바이러스성 질병의 진단을 직접 해보는 실험으로서 Norovirus에 감염된 환자의 가검물로부터 PCR을 이용하여 Norovirus의 ORF2 지역을 증폭하여 Detection하는 것이다. Norovirus가 RNA를 유전물질로 가지기 때문에 Reverse transcription을 이용하여 cDNA를 제작하였으며 이를 1차 PCR 후, 2차 Semi-nested PCR을 이용하여 감도를 상승시켰다. 실험 결과, Norovirus G2-3의 ORF1과 ORF2 사이의 300 bp 크기의 절편이 증폭되었으며 이를 통하여 Norovirus의 감염 및 관련된 질병의 진단을 확인해볼 수 있었다.

Introduction
PCR (Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄반응)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 원하는 fragment를 증폭 시키는 방법이다. DNA 양이 아주 적더라도 원하는 부분을 엄청난 양과 높은 정확도로 크게 늘릴 수 있고, 장비 또한 단순하기 때문에 간단하고 짧은 시간 내에 증폭할 수 있다.

<중 략>

Materials and Methods
바이러스의 RNA를 분리하는 과정은 Lysis, Bind, Wash 및 Elude의 4과정으로 나눌 수 있다. Lysis 과정에서는 먼저, Carrier-RNA-Buffer-AVE 5.6ul와 Buffer AVL Mix 560ul를 1.5ml e-tube에 넣은 후에 Virus suspension 140ul를 넣어 15초 동안 Vortexting 해준다. 이후, 10분 동안 Room temperature (15~25 ℃)에 Incubation하고, 짧게 centrifuge 시킨 다음, Ethanol(96~100%) 560ul를 넣고 15초 동안 Pulse-vortexting 해준다. 두 번째로 Bind 과정에서는 Lysis 과정에서 준비한 Sample 630ul를 준비된 QIAamp Mini spin column 에 넣는다.

참고 자료

Sambrook J. and D. W. Russell, Molecular Cloning: A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, U.S.A, pp8.1~8.24
Watson 외 5인, Molecular biology of the gene, 2008, 6th ed., CSHL Press, pp127~130