DNA cloning
- 최초 등록일
- 2012.04.16
- 최종 저작일
- 2011.12
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소개글
DNA cloning의 전체적인 과정입니다.
목차
1단계 : PCR
2단계 : gel extraction
3단계 : ligation & transformation
4단계 : mini-prep
본문내용
< DNA cloning >
- DNA cloning이란, 특정 DNA 조각을 벡터와 연결하여 숙주세포에 삽입 후 숙주세포의 무성생식으로 원하는 DNA 조각을 다량으로 얻는 방법이다.
- DNA cloning에는 4단계의 과정이 있는데, PCR → ligation → transformation → plasmid DNA miniprep 이다.
▶ 1st experiment : Polymerase Chain Reaction(PCR)
- 목적 : 소량의 특정 DNA 염기서열을 증폭시켜 대량으로 얻기 위함이다.
- 실험이론 : PCR의 원리는 다음과 같다.
1. DNA 변성 (Denaturation)
90~96℃로 가열하여 double strand DNA(dsDNA)를 single strand DNA(ssDNA)로 분리시킨다. 높은 온도일수록 ssDNA로 잘 이행되지만 Taq DNA polymerase도 높은 온도에서 활성이 낮아 질 수 있으므로 보통 94℃로 수행한다. 첫 cycle에서는 확실한 변성을 위하여 약 5분간 지속시킨다.
2. Primer 결합 (Annealing)
50~56℃에서 진행된다. 염기간의 결합은 G와 C는
참고 자료
없음