[western blotting] western blotting

목차

1.실험목적
2.실험재료및방법
3.실험결과
4.고찰

본문내용

western blotting이란 여러 가지 단백질들을 포함하고 있는 세포 또는 조직의 추출물을 전기영동하여 그 속에 들어 있는 단백질들을 크기 별로 구분한 다음 흡착지에 옮겨 놓고 조사하고자 하는 단백질의 항체와 결합시켜 그 단백질의 존재 유무와 크기 등을 밝히는 검사이다. 그러므로 immuno blotting이라고도 부른다.
western blotting방법은 여러 가지 단백질들을 함유하고 있는 혼합액을 SDS가 포함되어 있는 polyacrylamide gel에서 전기영동하여 단백질들을 크기에 따라 분리하여 나열시킨다. polyacrylamide gel에 nitrocellulose 또는 PVDF를 겹쳐 놓고 전기를 걸어 gel속에 있던 단백질들을 흡착지로 이동시킨다. 흡착지를 비닐팩에 넣고 어떤 단백질의 항체를 포함한 용액과 함께 배양한 후, 다시 그 항체에 대한 항체와 반응시킨다. 이 때 2차 항체에는 biotin이 결합되어 있어서 avidin이 결합된 perosidase와 반응시키면 avidin-biotin의 강력한 결합력 때문에 항원-1차 항체-2차 항체의 혼합체는 결국 peroxidase를 가지게 된다. 마지막 단계에서 과산화수소와 발색제를 함유한 반응액으로 처리하게 되면 peroxidase에 의하여 과산화수소가 분해될 때 발생하는 발생기 산소는 발색반응을 일으키고 흡착지 위에 존재하는 단백질은 띠 모양으로 나타나게 된다.

참고 자료

없음