2D-PAGE의 원리와 Protocol

소개글

2D-PAGE의 실험을 위한 원리와 Protocol입니다.
실험을 위한 기초공부로써 중요한 것만 적어놓은 레포트이니 참고 많이 하십시오.
감사합니다.

목차

1. 2D PAGE란?

2. 2D PAGE의 장점과 단점.

3. 2D PAGE의 Protocol

본문내용

1. 2D-PAGE 란?

-> Two-dimentional polyacrylamid gel electrophoresis (2D-PAGE) 는 단백질의 전하 (pi)를 isoelectric focusing (IEF)로 분리하는 방법이다. 처음에서의 dimention은 위의 protein의 pi로 인해 분리하지만 이어서 실시되는 두 번째 dimention은 2D-PAGE를 이용한 size(mr)로 인한 분리를 하여 protein complex에서 특정한 protein만을 정확한 resolution으로 분리할 수 있다.
2D-PAGE는 1-D electrophoresis로부터 시작된다. 그리고 이 lane product를 90도 방향으로 다시 전기영동을 하는 것인데, 처음의 dimension에서는 protein molecule들이 일차원적으로 한 lane에 혹은 다중 lane에 걸쳐 분리가 된다. 이 lane안에는 size가 비슷한 protein들이 섞여 있을 수도 있으므로 90도의 방향으로 pi에 의해서 분리를 해줌으로써 더 수득률을 높힐 수 있다. Two-dimension에서 protein은 isoelectric point (IEF)를 사용한 Technique를 이용하는데 이 point는 native state에서의 protein complex의 mass를 뜻한다. isoelectric point로 protein을 분리하는 것을 위에서 언급한 IEF라고 하며, 이는 gel에서 pH의 농도와 electrical potential을 적용시켜 주면서 실시된다. 한쪽 끝이 다른 쪽 보다 더 positive하게 만들고, pH는 단백질의 isoelectric point로 맞춰주게 하여 protein이 charge를 띌 수 있도록 해준다. 만약 이 때 protein이 positive charge라면 negative end 쪽으로 이동할 것이며, negative charge를 띈다면 positive end쪽으로 이동할 것이다.

참고 자료

없음