[분자유전학실험]3.Enhanced thermotolerance

소개글

실험서입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract

Chaperone은 여러 스트레스로부터 단백질을 보호해주는 분자들을 의미한다. Heat shock protein이 이 Chaperone의 한 종류이다. 실험은 heat shock protein을 직접 뽑아서 사용하지는 않지만 간접적으로 heat shock protein을 이용한 실험으로 cell의 생존율(BL21사용)을 확인해봄으로써 열에 대한 내성을 알아보는 것이다.
형질전환 되지 않은 pET11a와 형질 전환된 pET11a - DcHSP 17.7을 각각 동등하게 overnight culture 한 다음 sample의 O.D.값을 맞춰준다. IPTG과정과 희석과정을 거쳐 각각의 조건에서 도말한다. 도말 결과 형질전환을 하지 않은 pET11a는 control조건에서 각각 33개, 7개의 colony가 관찰되었다. 그리고 heat shock을 가해 주었을 때는 2개, 4개의 colony가 관찰되었다. 형질전환 시킨 pET11a - DcHSP 17.7는 control조건에서 colony가 하나도 관찰되지 않았으며, heat shock을 가해 주었을 때는 각각 10개의 colony가 관찰되었다. 이론대로라면 형질전환 되지 않은 pET11a는 본래 ampicillin에 대한 내성 부위를 가지고 있기 때문에 control의 두 배지의 경우에서 많은 생장이 일어나야하며 heat shock을 가해 주었을 때에는 균이 형질전환 되지 않았으므로 heat shock에 대하여 견디지 못하고 생장이 일어나지 못한다. pET11a - DcHSP 17.7은 control조건에서 pET11a와 크게 다를 바 없이 무난하게 균들이 생장해야하며 heat shock을 가해 주었을 때에도 heat shock protein에 의해 형질전환 되었기 때문에 heat shock에 대한 내성을 가지게 되므로 균들의 생장이 이루어져야 한다. 하지만 결과 값은 잘 나오지 않았으며 이는 실험방법적, 시약적 오류에 의한 것이라 할 수 있다.
만약 실험결과가 잘 나왔다면 우리가 실험에서 인공적으로 발현시킨 단백질이 HSP에 의한 결과라는 것을 antibody를 이용한 HSP 존재 사진을 첨부함으로써 확인시켜야 한다.


2. Introduction

생명과학 분야에서 Chaperone은 여러 스트레스로부터 단백질을 보호해주는 분자들을 의미한다. Chaperone 역시 단백질이다. 그러나 그들은 다른 단백질들을 보호하기 위해 진화한 별종들이다. 이들은 위험한 상황에는 다른 단백질에 꼭 달라붙어 있다가 단백질이 제대로 기능하게 되면 떨어진다.

참고 자료

• 미생물학 12판 (Brock biology of microorganisms) / Madigan 저 오계헌 역 / 바이오사이언스 / 2009.04.15 / p229
• 생명과학 / George B. johnson외 계명찬, 김애리, 전병학 역 / 동화기술 / 2007.03.10 / p60
• http://blog.naver.com/ari49?Redirect=Log&logNo=14002071490
• http://www.biovisualtech.com/bvplasmid/pET_11_a.htm