[미생물실험]3,4.미생물의 염색(그람,아포,음화,항산성)

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• 항산성 염색
대부분의 미생물은 단순염색이나 그람염색 등에 의해 잘 염색이 되지만 몇몇 균주 특히 Mycobacterium sp.는 염색이 되지 않고 항산성 염색법에 의해서만 염색이 되며, M. tuberculosis와 M. leprae는 병원성 미생물이므로 이들의 진단과 분류에 이 방법이 응용되고 있다. 즉 Mycobacterium sp.는 다른 미생물과 달리 세포벽이 두터운 왁스성 물질을 다량 함유하고 있어 염색이 잘 되지 않으며 가온 염색을 하여야 된다. 그리고 한 번 염색이 되면 Acid-alcohol로도 잘 탈색이 되지 않아 이러한 성질을 항산성(Acid fast)이라 하고 반면 대부분의 미생물은 Acid-alcohol에 의해 쉽게 탈색이 되는 Non-acid-fast 성질을 가지고 있다.
항산성 염색은 먼저 1차 염색시약으로 Carbol fuchsin을 사용한다. 일반 세균과는 달리 Mycobacterium은 methylene blue나 Crystal violet 같은 염색시약에 의해서 염색이 되지 않고, Phenol성 시약인 Carbol fuchsin은 Mycobacterium 세포벽의 주요성분인 지방성물질을 용해하는 성질이 있어 세포벽에 염색약이 흡착된다. 이러한 흡착을 도와주기 위해 열을 가하면 Carbol fuchsin은 지질 세포벽을 통과하여 세포질을 흡착하게 된다. 1차 염색후 탈색제로는 Acid-alcohol을 사용하여 탈색을 할 때는 가열된 슬라이드를 냉각하는 것이 좋다. 왜냐하면 냉각에 의해 왁스성의 세포물질이 경화되어 Acid-alcohol에 쉽게 탈색되지 않기 때문이다. 따라서 Mycobacterium 은 1차 염색약을 흡착된 상태가 유지되어 적색을 유지하게 된다. 반면, Non-acid-fast 균체는 왁스성 물질이 부족하여 쉽게 탈색되어 무색의 상태가 된다. 여기에 대응염색시약으로 methylene blue를 사용하여 2차 염색한다. 탈색된 Non-acid-fast 균체는 이 시약에 의해 염색이 되지만 탈색되지 않았던 Acid-fast 균체는 그대로 1차 염색약에 의해 붉은색을 띄게 된다.

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