[기초유전학실험]7.Reverse transcription polymerase chain reaction

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Exp 7. Reverse transcription polymerase
chain reaction (RT - PCR)
1. Abstract
저번 시간 까지 우리가 수업시간에는 클로닝에 대해 배웠었는데 이번시간에는 거기서 살짝 벗어나 RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction) 에 대해 알아보았다. RT-PCR을 통해 mRNA의 정량 방법을 알아보고 control이 왜 필요하고 어떻게 이용하는지를 알아보는 실험이었는데 먼저 RT-PCR이란 이중가닥의 DNA가 아닌 mRNA를 DNA로 전환시킴으로써 그 후 일반적인 PCR 방법을 통해 클로닝에 필요한 만큼의 cDNA를 증폭할 수 있는 기술이다. RT-PCR은 RNA isolation, reverse transcription(RT), PCR 등의 3단계로 나뉘는데 RNA isolation은 세포를 파괴한 다음 RNA를 분리하는 과정이고, reverse transcription(RT)는 mRNA로부터 cDNAfmf 합성하는 과정이다. 그리고 PCR은 RT반응으로 얻은 cDNA를 주형으로 PCR을 실시함으로써 mRNA를 검출하는 과정이다.
PCR결과 actin primer를 사용하는 경우 아래쪽에 actin band가 잡혔고, HSP primer를 사용하는 경우 HSP band가 잡히는 것을 볼 수 있었다. 이는 mRNA 추출할 때부터 actin mRNA, HSP mRNA 모두 추출되고 이것을 cDNA로 바꾸는 과정에서 oligo dT primer를 사용하였기 때문에 모든 mRNA가 cDNA로 바뀌게 된 것이다. 그래서 primer에 따라 PCR 결과가 달라지는 것이다. HSP gene는 외부에서 스트레스를 받았을 때 많은 발현을 하는 것을 알 수 있었는데 스트레스를 받은 시간이 늘어날수록(많은 양의 스트레스를 받을수록) 더 많은 발현을 하는 것을 알 수 있다.

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